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小小乖宝宝

金虫 (正式写手)

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[求助] 生物素标记葡萄糖氧化酶

老板让我标记葡萄糖氧化酶，我生物素标记抗体，效果很好，但不知道为什么一标记葡萄糖氧化酶，酶就失活了，怎么办啊？
还有，刚标记好直接用没问题，但是一放在-20度冰箱，酶就不行了

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1楼 2013-01-03 16:58:04

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royhahaha

木虫 (小有名气)

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引用回帖:

11楼: Originally posted by 一步一步 at 2013-02-19 08:54:19
你的抗体发生非特异性反应指的是什么？？
NHS-Biotin必须用有机试剂溶解的，用DMSO或者DMF都没有问题。单抗或者多抗都不会都什么问题。
你要是说抗体变性，我想问一下，你用DMSO将NHS-Biotin溶解成了多大的浓度啊 ...

我的过程是这样的：
1、先将单抗IgG 5g溶于5ml的 PH7.4的PBS缓冲液
2、称600微克的NHS-Biotin溶于150微升的DMSO中
3、然后在磁力搅拌的条件下，将NHS-Biotin的DMSO溶液加入到5ml的PBS缓冲液中，进行生物素标记反应。
4、反应40-60min后进行透析处理。
如果你有什么好的意见请直接提出来啊。多谢啦

我说的抗体变性是指：因为标记的是单抗，我们用水、血清、血浆作为样本反应，结果水没反应，血清和血浆都有反应。而抗原是血浆中才有的，血清中基本没有的。故初步判断，是出现了抗体变性。导致了非特异行反应。