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小小乖宝宝

金虫 (正式写手)

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[求助] 生物素标记葡萄糖氧化酶

老板让我标记葡萄糖氧化酶，我生物素标记抗体，效果很好，但不知道为什么一标记葡萄糖氧化酶，酶就失活了，怎么办啊？
还有，刚标记好直接用没问题，但是一放在-20度冰箱，酶就不行了

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1楼 2013-01-03 16:58:04

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

一步一步

木虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

引用回帖:

12楼: Originally posted by royhahaha at 2013-02-19 16:47:37
我的过程是这样的：
1、先将单抗IgG 5g溶于5ml的 PH7.4的PBS缓冲液
2、称600微克的NHS-Biotin溶于150微升的DMSO中
3、然后在磁力搅拌的条件下，将NHS-Biotin的DMSO溶液加入到5ml的PBS缓冲液中，进行生物素标记反 ...

你的那个判断说实话我没有理解。
针对你的步骤我有点疑问：
1. 你的单抗应该是已经纯化得到的对吧？
2. 你的单抗是5克溶于5mlPBS中？抗体浓度是1G/ml？你确定？？
3. 你的生物素浓度是4mg/ml？没错吧？
你先把你的单位解释一下吧，如果是1g/ml的抗体与600ug的生物素反应的话，应该是标记率很低的。如果抗体浓度是1mg/ml的话还可以考虑下。但是建议你把生物素浓度调整至10mg/ml.