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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 生物素标记葡萄糖氧化酶
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小小乖宝宝

金虫 (正式写手)

[求助] 生物素标记葡萄糖氧化酶

老板让我标记葡萄糖氧化酶，我生物素标记抗体，效果很好，但不知道为什么一标记葡萄糖氧化酶，酶就失活了，怎么办啊？
还有，刚标记好直接用没问题，但是一放在-20度冰箱，酶就不行了
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1楼 2013-01-03 16:58:04
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一步一步

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
16楼: Originally posted by 小小乖宝宝 at 2013-02-20 16:36:57
不好意思，放假回家了。今天才看到。我生物素标记的抗体还不错，特异性蛮明显的。就是生物素与蛋白以分子量1:20标记，透析一天一夜，然后。对了，你抗体透析前有没有除去叠氮化钠...

标记前透析一次就行的，不用提前除去。有的文献中海提到，叠氮化钠在一定浓度（小于等于3mM）下对标记不会有影响的。所以这个应该不是主要问题。当然如果你害怕有影响的话，在标记前多透析下就是了。
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17楼2013-02-21 08:40:47
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zhang881007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的标记量是多少，是一份子酶一份子生物素么
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shine
2楼2013-01-04 16:01:10
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小小乖宝宝

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhang881007 at 2013-01-04 16:01:10
你的标记量是多少，是一份子酶一份子生物素么

不是，是按照分子量1比20标记的
我现在想知道怎么能够去除未标记的生物素啊？
透析几次可以啊？
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3楼2013-01-04 16:47:39
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royhahaha

木虫 (小有名气)
★
wizardfan: 金币+1, 鼓励发帖交流 2013-02-17 09:38:45
我想求助下这位虫友，你生物素标记抗体时怎么标记的？  能否告诉下流程， 最近做了一个生物素标记，标记完后，结果抗体变性了。检测有非特异性反应。 悲剧的很啊
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4楼2013-02-16 11:32:26
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