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desheng101

木虫 (正式写手)

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[交流] 求大神指导，现在睡觉都是这个破实验（带图）已有3人参与

第一张图标记的是所需要的，其他都不是，可以看出来单酶切条带大约在6000，双酶切大约2300，4000.
但是相同的菌液第二图双酶切只能看到一条带，貌似是载体条带。载体大小2300.
第二次Maker和第一次稍有不同。
第一次酶切和测序结果都基本说明就是要的克隆。极度郁闷第一次和第二次的结果为啥不一样，菌种都是一个管的。

第一次单双酶切对比.jpg

第二次单双酶切图.jpg

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1楼 2013-01-01 18:06:51

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

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专业: 生物化学

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

首先你的胶放反了吧。还有，用的什么marker最好说明。
此外，你做酶切的不是质粒吗？怎么提到菌液的样子。你的酶切体系用的质粒太多，你的目的片段和载体都不是很小，没必要上很多量，用0.3-0.5ug质粒切就足够了。质粒量大有时候会造成酶切不完全，跑出来的带也不好看。
关于你的质粒是否正确的问题。第二次做双酶切的同时释否也做了单酶切对照？6K和2K多的带是很容易分辨的。