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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求大神指导，现在睡觉都是这个破实验（带图）
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desheng101

木虫 (正式写手)

[交流] 求大神指导，现在睡觉都是这个破实验（带图） 已有3人参与

第一张图标记的是所需要的，其他都不是，可以看出来单酶切条带大约在6000，双酶切大约2300，4000.
但是相同的菌液第二图双酶切只能看到一条带，貌似是载体条带。载体大小2300.
第二次Maker和第一次稍有不同。
第一次酶切和测序结果都基本说明就是要的克隆。极度郁闷第一次和第二次的结果为啥不一样，菌种都是一个管的。

第一次单双酶切对比.jpg



第二次单双酶切图.jpg
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1楼 2013-01-01 18:06:51
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
那就再提质粒酶切一次吧。两次不一样说明不了太大问题。
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VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
2楼2013-01-01 18:25:37
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
首先你的胶放反了吧。还有，用的什么marker最好说明。
此外，你做酶切的不是质粒吗？怎么提到菌液的样子。你的酶切体系用的质粒太多，你的目的片段和载体都不是很小，没必要上很多量，用0.3-0.5ug质粒切就足够了。质粒量大有时候会造成酶切不完全，跑出来的带也不好看。
关于你的质粒是否正确的问题。第二次做双酶切的同时释否也做了单酶切对照？6K和2K多的带是很容易分辨的。
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3楼2013-01-02 02:25:19
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ccharlien

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
质粒的量有点大
建议你把你的那管菌拿出来划线挑单克隆重新鉴定吧
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4楼2013-01-03 03:31:05
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