| 查看: 2888 | 回复: 6 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
大肠杆菌Red重组法基因敲除求助 已有1人参与
|
|||
|
我做大肠杆菌基因敲除，用的gene bridge的red/etrecombinantion试剂盒，按照里面的步骤，现在出现如下问题： 用阿拉伯糖诱导与不用阿拉伯糖诱导的菌，转入重组片段后，kan筛选的板上长了很多很多，但是pcr全都验证不出来，也换了引物，kit中的阳性对照的菌都能扩出来。。。按照理论，应该是阿拉伯糖诱导了的才能启动重组，板上长出克隆，而没有诱导的菌转入重组片段不能发生重组，kan板上就不能长。。。备注，用kan处理没有转入片段的菌，菌不能长。。。 求高手指教，并分享经验，告诉我每一步应该注意什么，然后我优化优化条件，看能不能做出来，多谢各位 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 分子生化实验经验积累 |
» 猜你喜欢
科研人必读：新一代 KRAS G12C 抑制剂 Olomorasib 的研究进展
已经有0人回复
-
BT-11（Omilancor）研究化合物全解析：从分子结构到实验应用要点
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有271人回复
-
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
-
BT投稿with editor状态快两周了，正常吗
已经有25人回复
-
Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈
已经有0人回复
-
RO4929097 解析：双苯并氮杂䓬骨架与 Notch 通路实验设计要点
已经有0人回复
-
分子量 1157 的 PROTAC 怎么配不析出：SGK3-PROTAC1 的溶解、分装与图谱复核
已经有0人回复
-
logP 6.1 的羧酸怎么配母液：GSK 650394 的溶解窗口与稀释顺序
已经有0人回复
-
从"水不溶"到 71 mg/mL：雷特格韦的 pH 依赖溶解与螯合色谱边界
已经有0人回复
-
133 Ų 的极性表面积，如何决定 TNG462 的母液配制与色谱条件
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- red基因敲除
已经有17人回复
- 大肠基因敲除后培养时出现细胞自溶现象
已经有9人回复
- 谁有用于大肠杆菌基因敲除的pKD46、pCP20等质粒
已经有7人回复
- 大肠杆菌基因重组时PKD46高温怎么都消除不了
已经有25人回复
- 大肠杆菌DH5a作感受态，PMD-19T载体连接重组的问题
已经有3人回复
- 【求助/交流】重组质粒转化入大肠杆菌的问题
已经有6人回复
- 【求助/交流】请教关于大肠杆菌lamda RED重组问题
已经有23人回复
- 重组后的大肠杆菌培养以后怎么变红了
已经有23人回复
- 细菌同源重组进行基因敲除的同源臂最小需要多少
已经有10人回复
oceanbird
铜虫 (初入文坛)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 60.5
- 帖子: 24
- 在线: 6.6小时
- 虫号: 208442
- 注册: 2006-03-05
- 性别: GG
- 专业: 生物海洋学与海洋生物资源
1)看你使用的Kan浓度，由于重组替换是单拷贝，不如质粒表达强烈，一般要求常规用量一半的kn，当用量不准或kn失效都会造成假阳性；（2）涂板的稀释梯度问题，不能原液涂，要10倍稀释，否则有假阳性，一般1个平板会有10-100个正确克隆。（3)商家提供的试剂盒问题。如果觉得麻烦或经验不足，可以委托公司做，如：广州迈博生物科技有限公司 
7楼2016-03-12 11:52:41
蜗牛-killer
金虫 (小有名气)
- 应助: 15 (小学生)
- 金币: 977.7
- 散金: 110
- 帖子: 258
- 在线: 526.2小时
- 虫号: 1220275
- 注册: 2011-03-03
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
2楼2012-12-31 11:57:24
stardu
新虫 (初入文坛)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 145.1
- 帖子: 15
- 在线: 20.2小时
- 虫号: 1260309
- 注册: 2011-04-09
- 性别: MM
- 专业: 微生物遗传育种学
3楼2013-05-13 09:15:34
|
本帖内容被屏蔽 |
4楼2013-05-13 14:24:42
