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qianqian2003

新虫 (初入文坛)

31楼2012-12-20 22:10:11
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hzjlan

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
清风寨: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-12-21 08:30:39
如果是质粒上的,只能用同一个启动子,又不想做成融合蛋白的话,可以用IRES或2A连接两个蛋白,这样可以表达两个蛋白,但是用IRES,前一个蛋白一定要带终止密码;如果用2A,前一个蛋白一定不能带终止密码,另外,IRES序列有点大,大概500+bp,但用它两个蛋白的表达量差不多,2A相对较小,但是后一个蛋白的表达量比不上前一个,具体差多少不好说。如果做成融合蛋白,可能问题也不大,如果觉得NotI作为linker短的话,可以加上flag,或His6,都比较有利于蛋白自身折叠。希望有帮助!
32楼2012-12-20 22:51:35
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Renavatio

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
清风寨: 金币+3 2012-12-21 08:34:28
建议可以使用2A元件连接这两个基因
Undefined!
33楼2012-12-21 00:38:30
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连将

木虫 (正式写手)

祝福楼主一切顺利!
34楼2012-12-21 01:09:32
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清风寨

银虫 (小有名气)

引用回帖:
32楼: Originally posted by hzjlan at 2012-12-20 22:51:35
如果是质粒上的,只能用同一个启动子,又不想做成融合蛋白的话,可以用IRES或2A连接两个蛋白,这样可以表达两个蛋白,但是用IRES,前一个蛋白一定要带终止密码;如果用2A,前一个蛋白一定不能带终止密码,另外,IRE ...

2A是两个A碱基么?
冷风过心变热
35楼2012-12-21 08:33:48
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清风寨

银虫 (小有名气)

引用回帖:
34楼: Originally posted by 连将 at 2012-12-21 01:09:32
祝福楼主一切顺利!

thanks
冷风过心变热
36楼2012-12-21 08:34:06
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platanus

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果中间没有终止子的话是可以表达的!
37楼2012-12-21 11:55:26
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shsDerek

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
有一定几率表达,要看细胞的修饰水平
38楼2012-12-21 12:27:10
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以表达的,GFP经常用于蛋白的融合表达,从而根据绿色荧光确定目的基因的细胞器或者组织定位。
39楼2012-12-21 17:59:18
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aofeng860308

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
在真核中表达,要同时表达两个基因的话,最好中间加入IRES序列,有了这个就一定可以表达两个基因了!另外,要共表达GFP和其他任何基因,有一个商业载体pIRES2-EGFP可以实现。
40楼2012-12-21 18:29:36
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