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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 将两个基因串联到启动子下面，两个基因都能表达么？
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qianqian2003

新虫 (初入文坛)
http://www.bioon.com.cn/protocol/showarticle.asp?newsid=3244
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31楼2012-12-20 22:10:11
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hzjlan

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
清风寨: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-12-21 08:30:39
如果是质粒上的，只能用同一个启动子，又不想做成融合蛋白的话，可以用IRES或2A连接两个蛋白，这样可以表达两个蛋白，但是用IRES，前一个蛋白一定要带终止密码；如果用2A，前一个蛋白一定不能带终止密码，另外，IRES序列有点大，大概500+bp，但用它两个蛋白的表达量差不多，2A相对较小，但是后一个蛋白的表达量比不上前一个，具体差多少不好说。如果做成融合蛋白，可能问题也不大，如果觉得NotI作为linker短的话，可以加上flag，或His6，都比较有利于蛋白自身折叠。希望有帮助！
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32楼2012-12-20 22:51:35
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Renavatio

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
清风寨: 金币+3 2012-12-21 08:34:28
建议可以使用2A元件连接这两个基因
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Undefined！
33楼2012-12-21 00:38:30
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连将

木虫 (正式写手)
祝福楼主一切顺利！
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34楼2012-12-21 01:09:32
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清风寨

银虫 (小有名气)
引用回帖:
32楼: Originally posted by hzjlan at 2012-12-20 22:51:35
如果是质粒上的，只能用同一个启动子，又不想做成融合蛋白的话，可以用IRES或2A连接两个蛋白，这样可以表达两个蛋白，但是用IRES，前一个蛋白一定要带终止密码；如果用2A，前一个蛋白一定不能带终止密码，另外，IRE ...

2A是两个A碱基么？
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冷风过心变热
35楼2012-12-21 08:33:48
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清风寨

银虫 (小有名气)
引用回帖:
34楼: Originally posted by 连将 at 2012-12-21 01:09:32
祝福楼主一切顺利！

thanks
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冷风过心变热
36楼2012-12-21 08:34:06
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platanus

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果中间没有终止子的话是可以表达的！
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37楼2012-12-21 11:55:26
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shsDerek

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有一定几率表达，要看细胞的修饰水平
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38楼2012-12-21 12:27:10
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以表达的，GFP经常用于蛋白的融合表达，从而根据绿色荧光确定目的基因的细胞器或者组织定位。
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39楼2012-12-21 17:59:18
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aofeng860308

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
在真核中表达，要同时表达两个基因的话，最好中间加入IRES序列，有了这个就一定可以表达两个基因了！另外，要共表达GFP和其他任何基因，有一个商业载体pIRES2-EGFP可以实现。
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40楼2012-12-21 18:29:36
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