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清风寨

银虫 (小有名气)

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[求助] 将两个基因串联到启动子下面，两个基因都能表达么？

想请问各位大侠，如果我将两个基因GFP、neo基因串联到A3启动子下游，两个基因都是完整的阅读框，中间用内切酶Not I酶切连接。下游再加上加尾信号和反向重复序列。这样子GFP和neo两个基因都能表达么？

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冷风过心变热

1楼 2012-12-20 08:43:34

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hzjlan

银虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

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清风寨: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-12-21 08:30:39

如果是质粒上的，只能用同一个启动子，又不想做成融合蛋白的话，可以用IRES或2A连接两个蛋白，这样可以表达两个蛋白，但是用IRES，前一个蛋白一定要带终止密码；如果用2A，前一个蛋白一定不能带终止密码，另外，IRES序列有点大，大概500+bp，但用它两个蛋白的表达量差不多，2A相对较小，但是后一个蛋白的表达量比不上前一个，具体差多少不好说。如果做成融合蛋白，可能问题也不大，如果觉得NotI作为linker短的话，可以加上flag，或His6，都比较有利于蛋白自身折叠。希望有帮助！