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qwky2010

金虫 (著名写手)

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[求助] 求如何理解锚定PCR原理，谢谢已有1人参与

看了几遍，还是没有搞懂，到底是啥意思，书里说在该方案中两条特异性引物是根据基因上部分序列设计的正反向序列特异性引物，分别用于扩增其3`端5`端的未知序列。见图，照图上所示，第一轮不就把已知序列的侧翼序列扩增出来了吗，为啥还要进行后续的几轮pcr，现在需要了解这个原理，真诚求教与达人，谢谢

图片3.png

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[ Last edited by qwky2010 on 2012-12-12 at 14:43 ]

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天道酬勤

1楼 2012-12-12 14:42:13

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引路者

铜虫 (初入文坛)

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虫号: 3997675
注册: 2015-07-30
性别: GG
专业: 空间生物学

抱歉我按错了，没说完！！！
1.锚定PCR的方法和RACE相同，应该就是同样技术的不同名称
在反转录的时候加上两个锚定的引物，这个引物能在反转录的时候使得第一链cDNA多出一段序列供PCR的引物结合用（多转录的序列在5‘或3’端，看进行哪一种RACE）
2.实际操作过程中，第一次PCR常没亮带或条带，所以进行第二次PCR（巢式PCR）进行特异性扩增（顺便富集）

以上，建议检索“RACE”，这里有很多相关的资料~