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lvye3707

金虫 (正式写手)

[求助] 重组质粒酶切

我的目的片段是1600左右,酶切位点是Xba I和Sac I ,载体时pMD18-T simple vector,第一张是重组质粒(marker后的4个泳带),第二张是重组质粒酶切后的(marker后的4个泳带),酶切后怎么会出现三条带?是我没酶切彻底嘛?

2012.12.11 提质粒 T正 与 PBI121.jpg



2012.12.12 酶切.jpg
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lvye3707: 金币+8, ★★★很有帮助, 双酶切怎么能切出中间那条带来?是星号活性? 2012-12-13 09:31:55
引用回帖:
6楼: Originally posted by lvye3707 at 2012-12-12 16:58:31
我酶切后为什么成了3条带呢?...

最下面一条是没有切动的质粒。上面一条大概是单酶切出来的条带。中间的那个有可能双酶切的条带。目的片段没有看到。话说回来,你用的marker不好,需要看3K-5K的带。
11楼2012-12-13 09:01:05
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laihx38j

禁虫 (职业作家)

感谢参与,应助指数 +1
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2楼2012-12-12 15:58:13
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lvye3707

金虫 (正式写手)

送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by laihx38j at 2012-12-12 15:58:13
根据你的电泳图显示,你这是典型的酶切不彻底。建议加大酶量或减少质粒的量

说明书说质粒DNA不大于1ug,我估算,质粒的量还不够。说酶切不彻底是因为没有目的条带么?
3楼2012-12-12 16:03:40
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laihx38j

禁虫 (职业作家)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
lvye3707: 金币+10 2012-12-12 17:01:20
lvye3707: 回帖置顶 2012-12-12 19:53:08
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4楼2012-12-12 16:35:12
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