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小齐018

木虫 (初入文坛)

[求助] Triozl法提植物RNA电泳图大家帮我分下分析

大家帮我分析下我的RNA能不能用，谢谢啊，新手提的！为什么第一条带那么亮，还有拖尾现象是为啥？多谢了！

Administrator 2012-12-06 20hr 46min.jpg
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1楼 2012-12-06 23:15:26
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by 小齐018 at 2012-12-07 13:42:54
降解是不是研磨的时候造成的？还是后面加氯仿和异丙醇的时候造成的？多谢了，亲，我第一次提经验不足！...

研磨的时候你是在液氮下做的吧？低温下减少宿主本身带有的核酸酶降解RNA。等到后面用酚氯仿是为了除去蛋白，除去蛋白的核酸由异丙醇沉淀析出。
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14楼2012-12-08 09:34:43
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普通回帖

bloodwar

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
首先是你的胶放反了吧，不知道你最后RNA的用途是什么，如果要做低浓度的实验的话，你的RNA质量就不行
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2楼2012-12-07 05:43:19
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-12-12 19:49:31
胶反了。点样孔有些脏，有蛋白污染。不知道你上了多少样。提得好的总RNA可以看到3条带，28S最亮，约为18S的两倍。5S的带要暗一些。
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3楼2012-12-07 07:41:45
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德国工兵铲

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-12-12 19:49:43
1 胶放反了
2 最小的那条带非常亮，RNA降解了。
3 胶空有杂物，影响下游实验
4 第一条，第二条带都不亮

总的来说质量是非常差，重新提取吧。
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4楼2012-12-07 10:56:28
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小齐018

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-07 07:41:45
胶反了。点样孔有些脏，有蛋白污染。不知道你上了多少样。提得好的总RNA可以看到3条带，28S最亮，约为18S的两倍。5S的带要暗一些。

加了4微升的样，为啥会出现5S这么亮啊？
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5楼2012-12-07 11:10:29
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小齐018

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bloodwar at 2012-12-07 05:43:19
首先是你的胶放反了吧，不知道你最后RNA的用途是什么，如果要做低浓度的实验的话，你的RNA质量就不行

我只做模版用，P出来克隆的！能不能用？
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6楼2012-12-07 11:11:04
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小齐018

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 德国工兵铲 at 2012-12-07 10:56:28
1 胶放反了
2 最小的那条带非常亮，RNA降解了。
3 胶空有杂物，影响下游实验
4 第一条，第二条带都不亮

总的来说质量是非常差，重新提取吧。

多谢了，我还有个问题就是加75%乙醇的时候下面不是有沉淀，要不要吹打混匀再离心，还是加上之后直接离心，加乙醇几次比较好？
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7楼2012-12-07 12:12:52
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德国工兵铲

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-12-12 19:50:02
引用回帖:
7楼: Originally posted by 小齐018 at 2012-12-07 12:12:52
多谢了，我还有个问题就是加75%乙醇的时候下面不是有沉淀，要不要吹打混匀再离心，还是加上之后直接离心，加乙醇几次比较好？...

不用吹打，那个一般来说就是你想要的东西了，一不小心抢头把它带出来了，你不是悲剧了，可以上下轻柔颠倒离心管十多次。如果是沉淀一直在管子底部，可以用手轻轻弹，把它弹起来。

乙醇洗两次，然后空甩一下，小心吸出剩下的液体，再放在冰上晾干5分钟左右就行了，可以加DEPC水溶解了。
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8楼2012-12-07 12:42:30
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 小齐018 at 2012-12-07 11:10:29
加了4微升的样，为啥会出现5S这么亮啊？...

RNA降解严重，一般5S都比较暗的。跑胶的话上两三微克总RNA。
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9楼2012-12-07 12:46:08
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小齐018

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-07 12:46:08
RNA降解严重，一般5S都比较暗的。跑胶的话上两三微克总RNA。...

降解是不是研磨的时候造成的？还是后面加氯仿和异丙醇的时候造成的？多谢了，亲，我第一次提经验不足！
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10楼2012-12-07 13:42:54
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