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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 外源基因稳转细胞的检测问题
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sarah-miao

银虫 (正式写手)

[求助] 外源基因稳转细胞的检测问题

最近在做讲外源基因通过一套稳转系统转进细胞中，后期主要就是基因检测，怎样才能确定这个基因外源包装表达合适只是在细胞膜或者细胞内表达呢，之前师姐有做过，基因PCR可以检测到，但是western一直 检测不到，然后我就考虑是否是由于基因在细胞内表达的影响，不能表达在外源或者细胞膜上，所以Western检测不到，做过这方面实验的前辈们可以指教下么？能否有什么方法可以检测该基因表达的定位什么的，然后继续后续的工作

[ Last edited by silicare on 2014-4-26 at 08:25 ]
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1楼 2012-12-04 22:11:26
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sarah-miao

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by myfinalway at 2012-12-08 12:30:59
WB 首先你要保证你的抗体可以与表达蛋白反应
另外如果转染的载体上有标签蛋白，可以用标签抗体来做
如果可以，建议你把GFP蛋白插到你的目的蛋白后面，如果转染成功，开始表达了，可以用荧光显微镜直接观察，不用破 ...

那蛋白表达的部位如何确定呢？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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6楼2012-12-08 16:08:32
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myfinalway

木虫 (正式写手)
WB 首先你要保证你的抗体可以与表达蛋白反应
另外如果转染的载体上有标签蛋白，可以用标签抗体来做
如果可以，建议你把GFP蛋白插到你的目的蛋白后面，如果转染成功，开始表达了，可以用荧光显微镜直接观察，不用破坏细胞
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2楼2012-12-08 12:30:59
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刘艳磊

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

看下相应的外源基因的表达产物有没有
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不积跬步，无以至千里
3楼2012-12-08 14:44:21
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sarah-miao

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 刘艳磊 at 2012-12-08 14:44:21
看下相应的外源基因的表达产物有没有

你是说WB
检测么？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2012-12-08 14:46:22
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