24小时热门版块排行榜    

查看: 1888  |  回复: 22
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

sarah-miao

银虫 (正式写手)

[求助] 外源基因稳转细胞的检测问题

最近在做讲外源基因通过一套稳转系统转进细胞中,后期主要就是基因检测,怎样才能确定这个基因外源包装表达合适只是在细胞膜或者细胞内表达呢,之前师姐有做过,基因PCR可以检测到,但是western一直 检测不到,然后我就考虑是否是由于基因在细胞内表达的影响,不能表达在外源或者细胞膜上,所以Western检测不到,做过这方面实验的前辈们可以指教下么?能否有什么方法可以检测该基因表达的定位什么的,然后继续后续的工作

[ Last edited by silicare on 2014-4-26 at 08:25 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

刘艳磊

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

看下相应的外源基因的表达产物有没有
不积跬步,无以至千里
3楼2012-12-08 14:44:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 23 个回答

myfinalway

木虫 (正式写手)

WB 首先你要保证你的抗体可以与表达蛋白反应
另外如果转染的载体上有标签蛋白,可以用标签抗体来做
如果可以,建议你把GFP蛋白插到你的目的蛋白后面,如果转染成功,开始表达了,可以用荧光显微镜直接观察,不用破坏细胞
2楼2012-12-08 12:30:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sarah-miao

银虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 刘艳磊 at 2012-12-08 14:44:21
看下相应的外源基因的表达产物有没有

你是说WB
检测么?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2012-12-08 14:46:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小周

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

首先确定你的细胞是稳转的不是瞬转的
看你的蛋白是不是有信号肽,有信号肽是外泌的,用软件分析下,是不是跨膜的等
再不确定就取培养上清,细胞裂解物一起做WB,或ELISA 检测都OK.

这些应该在实验开始时就应该计划好的。
5楼2012-12-08 15:18:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 科研人应该花精力去思考如何解决问题,而不是去凝练问题 +3 瞬息宇宙 2026-09-01 5/250 2026-09-02 08:01 by anjeeshine
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 8/400 2026-09-02 02:42 by Leogzhya
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +5 bjdxyxy 2026-08-26 5/250 2026-09-01 17:54 by 小伟大博士
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗? +4 瞬息宇宙 2026-08-31 4/200 2026-09-01 14:58 by jiaoxg
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +13 Kittylucky 2026-08-27 14/700 2026-09-01 11:06 by feng6531
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +6 叶九微 2026-08-26 6/300 2026-08-31 23:54 by yudaoqian88
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉? +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
信息提示
请填处理意见