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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 反相高压液相色谱
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qazwsxedc9328

金虫 (著名写手)

[求助] 反相高压液相色谱

试验要用反相高压液相色谱，里边要用到TFA，不了解它的原理和作用，烦请各位高手指点指点！
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1楼 2012-12-03 16:10:08
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

悠悠落叶

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
qazwsxedc9328: 金币+2, ★★★★★最佳答案, 谢谢你的回帖 2012-12-05 15:17:20
TFA就跟你做其他的加缓冲盐一样，一般的纯化或者分析多肽蛋白使用，在高的pH下多肽就不容易发生很严重的二级结构变化，还有就是加了TFA后洗脱和分离能力变强，防止多肽和蛋白在柱料上大量的残留，一般的纯化出来的多肽和蛋白都是TFA盐，然后要转变为其他盐的话需要再进行换盐处理，貌似是这个原因，希望大虫继续补充
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7楼2012-12-05 10:20:09
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普通回帖

qazwsxedc9328

金虫 (著名写手)
怎么没人回复呢，我来支持支持。
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2楼2012-12-03 20:45:52
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行无人

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
qazwsxedc9328: 金币+1, ★★★★★最佳答案, 提供关于层析的方面多一些就更好了 2012-12-04 15:47:46
用作溶剂，有机氟化合物（杀虫剂、染料、化学试剂）的制取原料，酯化反应、聚合反应和缩合反应的催化剂，羟基和氨基的保护基，也用于多肽合成中除去氨基酸的叔丁氧羰基（t-boc）保护基。 　　三氟乙酸有很好的溶解力，也有无机酸一样的强酸性。与二硫化碳合用时，可以溶解蛋白质。 　　有时也可用三氟乙酸的盐。室温下三氟乙酸汞使氟苯起汞化反应（亲电取代），也可将腙转化为重氮化合物。此酸的铅盐可将芳烃转化为酚。
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3楼2012-12-03 20:53:00
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qazwsxedc9328

金虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 行无人 at 2012-12-03 20:53:00
用作溶剂，有机氟化合物（杀虫剂、染料、化学试剂）的制取原料，酯化反应、聚合反应和缩合反应的催化剂，羟基和氨基的保护基，也用于多肽合成中除去氨基酸的叔丁氧羰基（t-boc）保护基。 　　三氟乙酸有很好的溶解力 ...

TFA是一种有机酸？
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4楼2012-12-04 15:44:44
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qazwsxedc9328

金虫 (著名写手)
哪位大侠知道TFA在反相高压液相色谱流动相中的作用及其原理呢？谢谢！
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5楼2012-12-04 16:18:03
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qazwsxedc9328

金虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 行无人 at 2012-12-03 20:53:00
用作溶剂，有机氟化合物（杀虫剂、染料、化学试剂）的制取原料，酯化反应、聚合反应和缩合反应的催化剂，羟基和氨基的保护基，也用于多肽合成中除去氨基酸的叔丁氧羰基（t-boc）保护基。 　　三氟乙酸有很好的溶解力 ...

您好！烦请问问TFA是一种有机酸对不对？
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6楼2012-12-04 22:59:29
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qazwsxedc9328

金虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 悠悠落叶 at 2012-12-05 10:20:09
TFA就跟你做其他的加缓冲盐一样，一般的纯化或者分析多肽蛋白使用，在高的pH下多肽就不容易发生很严重的二级结构变化，还有就是加了TFA后洗脱和分离能力变强，防止多肽和蛋白在柱料上大量的残留，一般的纯化出来的多 ...

谢谢您的回帖！烦请再问问在高的pH下多肽就不容易发生很严重的二级结构变化，其结果怎样呢？还有就是为什么加了TFA后洗脱和分离能力变强了呢？谢谢你的指点！
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8楼2012-12-05 15:20:10
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悠悠落叶

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
qazwsxedc9328: 金币+1, ★有帮助, 谢谢您的回帖！ 2012-12-06 21:29:23
引用回帖:
8楼: Originally posted by qazwsxedc9328 at 2012-12-05 15:20:10
谢谢您的回帖！烦请再问问在高的pH下多肽就不容易发生很严重的二级结构变化，其结果怎样呢？还有就是为什么加了TFA后洗脱和分离能力变强了呢？谢谢你的指点！...

这个具体原理也没细研究过，关键是不一样都，有的杂质会在TFA下分离效果好，有的是在其他的盐缓冲盐流动相下面分离度好，如果一种流动相一次纯化不能达到好的效果，可以用另一种盐流动相再分离一次，这样相结合的分离方法还是比较不错的
在TFA条件下和多肽成盐了可能是，而且是成盐比较紧密，所以会有好的洗脱和分离效果，最后还是要具体到你要分离的物质怎么样，好不好纯化和杂质好不好分离上来，多做几个实验比较一下更能加深这方面的认识
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9楼2012-12-05 15:55:23
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qazwsxedc9328

金虫 (著名写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 悠悠落叶 at 2012-12-05 15:55:23
这个具体原理也没细研究过，关键是不一样都，有的杂质会在TFA下分离效果好，有的是在其他的盐缓冲盐流动相下面分离度好，如果一种流动相一次纯化不能达到好的效果，可以用另一种盐流动相再分离一次，这样相结合的分 ...

谢谢您的回帖！我在网上搜索有这样一个结果，不知您怎么看“流动相的pH对样品溶质的电离状态影响很大，进而影响其疏水性，所以在分离肽类和蛋白质等生物大分子的过程中，经常要加入修饰性的离子对物质，最常用的离子对试剂是三氟乙酸（TFA），使用浓度为0.1%，使流动相的pH值为2～3，这样可以有效地抑制氨基酸上α羧基的离解，使其疏水性增加，延长洗脱时间，提高分辨率和分离效果。”这样理解对不对？谢谢您的指点！
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10楼2012-12-06 21:36:53
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