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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 实验室分析、仪器 » 葡聚糖凝胶柱被堵了，怎么办？
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hnwjj87

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1楼 2012-12-01 13:02:47
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wwy0713

金虫 (小有名气)
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hnwjj87: 回帖置顶 2012-12-04 13:37:11
蛋白堵柱子多是因为上样液体不干净 有蛋白沉淀了 才会发生 首先要保证上样液体澄清 过膜是一定要的 0.2的 或者0.45的都行  这个是预防柱子不被堵住  
第二 如果柱子不幸还是堵了 先用0.2M的碱冲 至少冲3倍柱子的体积 再换0.2的酸（盐酸）冲  最后再用冲柱子的缓冲液冲至流出液的pH为中性了 就可以了
如果这个方法还不行 那就只能换填料了
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4楼2012-12-02 14:21:18
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wwy0713

金虫 (小有名气)
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7楼: Originally posted by hnwjj87 at 2012-12-03 21:45:21
谢谢 我用的是葡聚糖凝胶G-50 自己装的柱子，上样的时候每次都要过膜吗？我以前都是直接上样，没有过膜，我是分离多肽的，有必要过膜吗？谢谢...

不管是上什么柱子都必须过膜！这个操作是一定的 没的商量 虽然肉眼可能看不到什么杂质沉淀的 但是柱子的孔径本来就很小 稍微有点脏东西就会堵
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9楼2012-12-04 09:50:27
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wwy0713

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by hnwjj87 at 2012-12-03 21:39:58
谢谢 我把图的那部分倒出来了，这部分填料里面明显看到好多混作物，不知道这部分填料还能用不？谢谢...

可以试着按我说的方法洗一洗 先碱后酸 如果可以洗干净的话 还是可以用的 如果不行就是不能用了 以后记得上样前过膜就行啦
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10楼2012-12-04 09:52:06
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研究生9113

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
直接洗脱算了！重新装柱子
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梦想就是让你感觉到坚持就是幸福的东西
2楼2012-12-01 14:02:41
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行板如歌

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
堵了，如果你能找到堵的部分（一般在最上方），把那一段挖去就OK了
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3楼2012-12-01 15:58:26
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hnwjj87

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5楼2012-12-03 21:36:34
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hnwjj87

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hnwjj87

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7楼2012-12-03 21:45:21
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行板如歌

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hnwjj87: 金币+2, ★有帮助, 谢谢 2012-12-04 07:59:56
引用回帖:
7楼: Originally posted by hnwjj87 at 2012-12-03 21:45:21
谢谢 我用的是葡聚糖凝胶G-50 自己装的柱子，上样的时候每次都要过膜吗？我以前都是直接上样，没有过膜，我是分离多肽的，有必要过膜吗？谢谢...

葡聚糖上柱不过滤样品会堵死啊~~我过滤有时候还因为析出而堵塞呢~~
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8楼2012-12-03 22:07:26
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