24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 3868  |  回复: 24
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

onlycwt

铜虫 (小有名气)

[求助] EDC/NHS活化金电极-硫醇后抗体固定不上

最近在做生物传感器,按照如下步骤进行,但不知为什么抗体修饰不上去,请大侠帮我看看哪里有问题:
1、预处理金电极:化学抛光+电化学抛光
2、10毫摩 11-巯基十一烷酸乙醇溶液中避光浸泡3小时
3、75mM/15mM  EDC/NHS水溶液浸泡1小时
4、电极自然晾干后滴加20uL 0.5mg/ml BSA水溶液,封装好在37°下反应1小时或4°下12小时(暂时用便宜的BSA代替抗体,看能不能修饰上)
5、将电极轻轻浸入双蒸水1分钟,取出后测试
--------------------------------------------------------------------
不知道为什么就是不能修饰上去,EDC/NHS 活化那步电阻变小很多,跟文献相符,但不知带是否活化成功。

请帮忙看看哪里出了问题
回复此楼
莫听穿林打叶声,何妨吟啸且徐行。
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天堂方向

禁虫 (文坛精英)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
onlycwt: 金币+7, ★★★很有帮助 2012-11-28 20:52:18
本帖内容被屏蔽

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

6楼2012-11-28 11:48:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 25 个回答

onlycwt

铜虫 (小有名气)

另外,EDC/NHS溶液是混合在一起用还是分开,活化的时候需要现配吗?
莫听穿林打叶声,何妨吟啸且徐行。
2楼2012-11-27 20:55:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Jackcd12

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
onlycwt: 金币+5 2012-11-27 21:19:18
硫醇在Au表面的自组装方法虽已使用20年了,看似简单,但要获得满意的单分子膜却不是想象的那么容易。这个自组装过程中最关键的要素是保证Au表面的干净(无污染),其它的都很简单。因此,你如果是Au棒(不是Au薄膜)电极,出来起来就大胆些,采用强氧化(浓H2SO4+H2O2, 80C, 超声5-10min),水清洗后,乙醇洗,马上放入硫醇中,尽量避免Au与污浊的空气接触,组装时间过夜更好。
不要忙于下一步,首先应该检测自组装效果,最好用铁氰化钾的CV法(阻抗谱)测试,可以后,表面这种预处理方法有效,以后采用。
然后,再重复一次,或几次,再往下走。
Themoreamanlearns,themoreheknowshisignorance!
3楼2012-11-27 21:03:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

onlycwt

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Jackcd12 at 2012-11-27 21:03:59
硫醇在Au表面的自组装方法虽已使用20年了,看似简单,但要获得满意的单分子膜却不是想象的那么容易。这个自组装过程中最关键的要素是保证Au表面的干净(无污染),其它的都很简单。因此,你如果是Au棒(不是Au薄膜) ...

做了实验,发现自组装3小时和自组装14小时的电阻几乎一样,所以采用3小时,怎样知道硫醇组装的好还是坏,电阻都是那么大。
莫听穿林打叶声,何妨吟啸且徐行。
4楼2012-11-27 21:23:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见