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onlycwt

铜虫 (小有名气)

[求助] EDC/NHS活化金电极-硫醇后抗体固定不上

最近在做生物传感器,按照如下步骤进行,但不知为什么抗体修饰不上去,请大侠帮我看看哪里有问题:
1、预处理金电极:化学抛光+电化学抛光
2、10毫摩 11-巯基十一烷酸乙醇溶液中避光浸泡3小时
3、75mM/15mM  EDC/NHS水溶液浸泡1小时
4、电极自然晾干后滴加20uL 0.5mg/ml BSA水溶液,封装好在37°下反应1小时或4°下12小时(暂时用便宜的BSA代替抗体,看能不能修饰上)
5、将电极轻轻浸入双蒸水1分钟,取出后测试
--------------------------------------------------------------------
不知道为什么就是不能修饰上去,EDC/NHS 活化那步电阻变小很多,跟文献相符,但不知带是否活化成功。

请帮忙看看哪里出了问题
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羧基活化EDC|DCC,NHS 金纳米棒及修饰 金电极 电化学

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莫听穿林打叶声,何妨吟啸且徐行。
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onlycwt

铜虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by 天堂方向 at 2012-11-28 11:48:53
EDC/NHS活化了,电极自然晾干后滴加20uL 0.5mg/ml BSA水溶液

为什么要自然晾干,而不是氮气吹干?
觉得是这步出问题了。时间太久,EDC/NHS活化效果没有了,所以无法连接。

因为我怕用氮气吹就把电极表面的硫醇吹松了,测试的时候会掉,所以采用自然晾干。请问EDC/NHS活化后是会很快失活的吗?另外EDC/NHS溶液需要现配现用吗?
莫听穿林打叶声,何妨吟啸且徐行。
7楼2012-11-28 20:51:58
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onlycwt

铜虫 (小有名气)

另外,EDC/NHS溶液是混合在一起用还是分开,活化的时候需要现配吗?
莫听穿林打叶声,何妨吟啸且徐行。
2楼2012-11-27 20:55:17
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Jackcd12

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
onlycwt: 金币+5 2012-11-27 21:19:18
硫醇在Au表面的自组装方法虽已使用20年了,看似简单,但要获得满意的单分子膜却不是想象的那么容易。这个自组装过程中最关键的要素是保证Au表面的干净(无污染),其它的都很简单。因此,你如果是Au棒(不是Au薄膜)电极,出来起来就大胆些,采用强氧化(浓H2SO4+H2O2, 80C, 超声5-10min),水清洗后,乙醇洗,马上放入硫醇中,尽量避免Au与污浊的空气接触,组装时间过夜更好。
不要忙于下一步,首先应该检测自组装效果,最好用铁氰化钾的CV法(阻抗谱)测试,可以后,表面这种预处理方法有效,以后采用。
然后,再重复一次,或几次,再往下走。
Themoreamanlearns,themoreheknowshisignorance!
3楼2012-11-27 21:03:59
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onlycwt

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Jackcd12 at 2012-11-27 21:03:59
硫醇在Au表面的自组装方法虽已使用20年了,看似简单,但要获得满意的单分子膜却不是想象的那么容易。这个自组装过程中最关键的要素是保证Au表面的干净(无污染),其它的都很简单。因此,你如果是Au棒(不是Au薄膜) ...

做了实验,发现自组装3小时和自组装14小时的电阻几乎一样,所以采用3小时,怎样知道硫醇组装的好还是坏,电阻都是那么大。
莫听穿林打叶声,何妨吟啸且徐行。
4楼2012-11-27 21:23:42
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