应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
161/2返回列表12下一页
查看: 1168  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

快乐棒棒糖

金虫 (初入文坛)

[求助] 原核表达

我最近在做原核表达，实验中出现很奇怪的现象（下面有图）。由于以前没有做过，希望大家给予帮助啊，谢谢大家啊。
（28摄氏度诱导了5个小时，目的蛋白没有诱导出来：15KD左右，Marker：10,15,25,35.。。。。）

20121121607.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2012-11-22 13:25:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你上的是全蛋白还是可溶蛋白？是用IPTG诱导的吗？话说回来，你的蛋白样品处理有问题啊，怎么是模糊一片的。可能胶也没有做太好。
赞一下 回复此楼
2楼2012-11-22 13:32:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangyhai

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
胶没跑好，样品也没处理好。蛋白有没有表达尚不能判定。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

快乐棒棒糖
静心做事。
3楼2012-11-22 13:42:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

快乐棒棒糖

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-22 13:32:07
你上的是全蛋白还是可溶蛋白？是用IPTG诱导的吗？话说回来，你的蛋白样品处理有问题啊，怎么是模糊一片的。可能胶也没有做太好。

是用IPTG诱导的全蛋白。我第一次做，是按照文献上的方法处理的蛋白样品。你们做原核表达有经验，能告诉我蛋白样品处理的具体过程吗？还有制胶的注意事项。谢谢啦！
赞一下 回复此楼
4楼2012-11-23 18:56:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

快乐棒棒糖

金虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by jiangyhai at 2012-11-22 13:42:44
胶没跑好，样品也没处理好。蛋白有没有表达尚不能判定。

恩我用的是80V跑浓缩胶，然后用的120v跑分离胶。菌液离心后用PBS洗一次，然后又用PBS溶解，之后就交上样缓冲液，100摄氏度煮沸10分钟，然后就点样了。有什么错误的地方希望请给予指点。谢谢啊，也希望虫友能分享一下你们的经验。谢谢啊
赞一下 回复此楼
5楼2012-11-23 21:52:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 快乐棒棒糖 at 2012-11-23 21:52:53
恩我用的是80V跑浓缩胶，然后用的120v跑分离胶。菌液离心后用PBS洗一次，然后又用PBS溶解，之后就交上样缓冲液，100摄氏度煮沸10分钟，然后就点样了。有什么错误的地方希望请给予指点。谢谢啊，也希望虫友能分享一 ...

煮过的样品最好离心一下，否则可能会有不溶物可能堵塞胶。还有，如果第一次做这个蛋白诱导，要摸一下IPTG的条件（IPTG浓度、时间、温度等）。文献上说的条件不一定完全适合。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

快乐棒棒糖
6楼2012-11-24 02:29:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xj0311

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
同意六楼的意见，优化一下条件，对你的蛋白表达有用，再说28度诱导5小时，时间可能短，要是可溶性表达建议诱导时间长些温度高些
赞一下 回复此楼
7楼2012-11-24 08:39:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

快乐棒棒糖

金虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-24 02:29:13
煮过的样品最好离心一下，否则可能会有不溶物可能堵塞胶。还有，如果第一次做这个蛋白诱导，要摸一下IPTG的条件（IPTG浓度、时间、温度等）。文献上说的条件不一定完全适合。...

恩，忘记说了，我煮过之后离心10分钟才上样的。上图就是在固定温度条件下，IPTG浓度分别为0.2,0.4,0.6，0.8，1进行诱导的。（从左到右）我就是想先确定IPTG的浓度在摸索温度和时间的，因为实验室条件有限。
赞一下 回复此楼
8楼2012-11-24 08:57:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

快乐棒棒糖

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by xj0311 at 2012-11-24 08:39:36
同意六楼的意见，优化一下条件，对你的蛋白表达有用，再说28度诱导5小时，时间可能短，要是可溶性表达建议诱导时间长些温度高些

恩，知道了，谢谢啊。我查过一些资料和我做的同一种基因在不同的物种上好像都是包涵体沉淀，那我应该怎么做啊？
赞一下 回复此楼
9楼2012-11-24 08:58:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hippo_li

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是上样量太大了，完全看不到条带，感觉是蛋白太多了全部连成一片，上样量减少一些看看能不能跑成条带吧。SDS-PAGE分辨率挺高的，不需要上太多样品。
赞一下 回复此楼
10楼2012-11-24 11:01:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 快乐棒棒糖 的主题更新
161/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085600材料与化工调剂 +15 kikiki7 2026-03-30 15/750 2026-03-31 04:02 by fmesaito
[考研] 合肥区域性重点一本招收调剂 +4 6266jl 2026-03-30 4/200 2026-03-30 21:48 by zhuangyan123
[考研] 291求调剂 +8 Y-cap 2026-03-29 11/550 2026-03-30 21:03 by Y-cap
[考研] 一志愿郑州大学，080500学硕，总分317分求调剂 +10 举个栗子oi 2026-03-24 11/550 2026-03-30 19:31 by michael2011
[考研] 材料化工340求调剂 +3 jhx777 2026-03-30 3/150 2026-03-30 17:54 by JourneyLucky
[考研] 317分 一志愿南理工材料工程 本科湖工大 求调剂 +12 芋泥小铃铛 2026-03-28 12/600 2026-03-30 17:06 by wangjy2002
[考研] 332求调剂 +6 @MZB382400 2026-03-28 6/300 2026-03-30 16:57 by 无际的草原
[考研] 318求调剂 +7 陈晨79 2026-03-30 7/350 2026-03-30 10:49 by 探123
[考研] 295求调剂 +5 wei-5 2026-03-26 5/250 2026-03-30 08:34 by 探123
[考研] 一志愿北京工业大学，324分求调剂 +6 零八# 2026-03-28 6/300 2026-03-29 21:20 by nanaliuyun
[考研] 一志愿南昌大学324求调剂 +5 hanamiko 2026-03-29 5/250 2026-03-29 16:46 by 学员8dgXkO
[硕博家园] 招收生物学/细胞生物学调剂 +4 IceGuo 2026-03-26 5/250 2026-03-29 01:25 by griffith2014
[考研] 286求调剂 +4 丢掉懒惰 2026-03-27 7/350 2026-03-28 08:07 by baoball
[考研] 352分 化工与材料 +5 海纳百川Ly 2026-03-27 5/250 2026-03-28 03:39 by fmesaito
[考研] 330一志愿中国海洋大学 化学工程 085602 有读博意愿 求调剂 +3 wywy.. 2026-03-27 4/200 2026-03-28 03:32 by fmesaito
[考研] 070300化学求调剂 +4 起个名咋这么难 2026-03-27 4/200 2026-03-27 21:39 by 83503孙老师
[考研] 324求调剂 +5 hanamiko 2026-03-26 5/250 2026-03-27 10:33 by wangjy2002
[考研] 求调剂 +6 林之夕 2026-03-24 6/300 2026-03-27 08:38 by hypershenger
[考研] 一志愿天津大学339材料与化工求调剂 +3 江往卖鱼 2026-03-26 3/150 2026-03-26 09:42 by 王小欠i
[考研] 293求调剂 +7 加一一九 2026-03-24 7/350 2026-03-25 12:02 by userper
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭