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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达
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快乐棒棒糖

金虫 (初入文坛)

[求助] 原核表达

我最近在做原核表达，实验中出现很奇怪的现象（下面有图）。由于以前没有做过，希望大家给予帮助啊，谢谢大家啊。
（28摄氏度诱导了5个小时，目的蛋白没有诱导出来：15KD左右，Marker：10,15,25,35.。。。。）

20121121607.jpg
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1楼 2012-11-22 13:25:45
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 快乐棒棒糖 at 2012-11-23 21:52:53
恩我用的是80V跑浓缩胶，然后用的120v跑分离胶。菌液离心后用PBS洗一次，然后又用PBS溶解，之后就交上样缓冲液，100摄氏度煮沸10分钟，然后就点样了。有什么错误的地方希望请给予指点。谢谢啊，也希望虫友能分享一 ...

煮过的样品最好离心一下，否则可能会有不溶物可能堵塞胶。还有，如果第一次做这个蛋白诱导，要摸一下IPTG的条件（IPTG浓度、时间、温度等）。文献上说的条件不一定完全适合。
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快乐棒棒糖
6楼2012-11-24 02:29:13
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你上的是全蛋白还是可溶蛋白？是用IPTG诱导的吗？话说回来，你的蛋白样品处理有问题啊，怎么是模糊一片的。可能胶也没有做太好。
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2楼2012-11-22 13:32:07
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jiangyhai

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
胶没跑好，样品也没处理好。蛋白有没有表达尚不能判定。
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快乐棒棒糖
静心做事。
3楼2012-11-22 13:42:44
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快乐棒棒糖

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-22 13:32:07
你上的是全蛋白还是可溶蛋白？是用IPTG诱导的吗？话说回来，你的蛋白样品处理有问题啊，怎么是模糊一片的。可能胶也没有做太好。

是用IPTG诱导的全蛋白。我第一次做，是按照文献上的方法处理的蛋白样品。你们做原核表达有经验，能告诉我蛋白样品处理的具体过程吗？还有制胶的注意事项。谢谢啦！
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4楼2012-11-23 18:56:29
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