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金虫 (初入文坛)

[求助] 原核表达

我最近在做原核表达,实验中出现很奇怪的现象(下面有图)。由于以前没有做过,希望大家给予帮助啊,谢谢大家啊。
(28摄氏度诱导了5个小时,目的蛋白没有诱导出来:15KD左右,Marker:10,15,25,35.。。。。)

20121121607.jpg
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jiangyhai

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
胶没跑好,样品也没处理好。蛋白有没有表达尚不能判定。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

静心做事。
3楼2012-11-22 13:42:44
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你上的是全蛋白还是可溶蛋白?是用IPTG诱导的吗?话说回来,你的蛋白样品处理有问题啊,怎么是模糊一片的。可能胶也没有做太好。
2楼2012-11-22 13:32:07
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金虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-22 13:32:07
你上的是全蛋白还是可溶蛋白?是用IPTG诱导的吗?话说回来,你的蛋白样品处理有问题啊,怎么是模糊一片的。可能胶也没有做太好。

是用IPTG诱导的全蛋白。我第一次做,是按照文献上的方法处理的蛋白样品。你们做原核表达有经验,能告诉我蛋白样品处理的具体过程吗?还有制胶的注意事项。谢谢啦!
4楼2012-11-23 18:56:29
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金虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by jiangyhai at 2012-11-22 13:42:44
胶没跑好,样品也没处理好。蛋白有没有表达尚不能判定。

恩我用的是80V跑浓缩胶,然后用的120v跑分离胶。菌液离心后用PBS洗一次,然后又用PBS溶解,之后就交上样缓冲液,100摄氏度煮沸10分钟,然后就点样了。有什么错误的地方希望请给予指点。谢谢啊,也希望虫友能分享一下你们的经验。谢谢啊
5楼2012-11-23 21:52:53
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