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金虫 (初入文坛)

[求助] 原核表达

我最近在做原核表达,实验中出现很奇怪的现象(下面有图)。由于以前没有做过,希望大家给予帮助啊,谢谢大家啊。
(28摄氏度诱导了5个小时,目的蛋白没有诱导出来:15KD左右,Marker:10,15,25,35.。。。。)

20121121607.jpg
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金虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by xj0311 at 2012-11-24 08:39:36
同意六楼的意见,优化一下条件,对你的蛋白表达有用,再说28度诱导5小时,时间可能短,要是可溶性表达建议诱导时间长些温度高些

恩,知道了,谢谢啊。我查过一些资料和我做的同一种基因在不同的物种上好像都是包涵体沉淀,那我应该怎么做啊?
9楼2012-11-24 08:58:32
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你上的是全蛋白还是可溶蛋白?是用IPTG诱导的吗?话说回来,你的蛋白样品处理有问题啊,怎么是模糊一片的。可能胶也没有做太好。
2楼2012-11-22 13:32:07
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jiangyhai

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
胶没跑好,样品也没处理好。蛋白有没有表达尚不能判定。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

静心做事。
3楼2012-11-22 13:42:44
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金虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-22 13:32:07
你上的是全蛋白还是可溶蛋白?是用IPTG诱导的吗?话说回来,你的蛋白样品处理有问题啊,怎么是模糊一片的。可能胶也没有做太好。

是用IPTG诱导的全蛋白。我第一次做,是按照文献上的方法处理的蛋白样品。你们做原核表达有经验,能告诉我蛋白样品处理的具体过程吗?还有制胶的注意事项。谢谢啦!
4楼2012-11-23 18:56:29
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