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快乐棒棒糖

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by hippo_li at 2012-11-24 11:01:18
是不是上样量太大了，完全看不到条带，感觉是蛋白太多了全部连成一片，上样量减少一些看看能不能跑成条带吧。SDS-PAGE分辨率挺高的，不需要上太多样品。

我们上样用了20微升。一般情况下应该是多少啊？
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11楼2012-11-24 11:13:40
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by 快乐棒棒糖 at 2012-11-24 08:58:32
恩，知道了，谢谢啊。我查过一些资料和我做的同一种基因在不同的物种上好像都是包涵体沉淀，那我应该怎么做啊？...

如果你是想纯化目的蛋白，你可以直接收集纯化包涵体，然后复性。不过，有的蛋白复性效果不好。你也可以优化诱导条件，使其部分可溶。然后超声破碎细胞，从可溶部分纯化目的蛋白。
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12楼2012-11-24 12:28:55
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你这胶做的有问题 怎么鉴定胶好不好 看你的marker带全不全 带不全 就不好
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13楼2012-11-24 12:43:51
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hippo_li

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
11楼: Originally posted by 快乐棒棒糖 at 2012-11-24 11:13:40
我们上样用了20微升。一般情况下应该是多少啊？...

上样量跟你的蛋白浓度有关，之前有做过类似的实验能跑出条带吗？实验室其他人用相同的条件能跑出条带吗？没有的话可以点样的时候点几个不同体积或者稀释度的样品。我觉得你现在首先把胶跑好，再考虑优化表达条件的问题，现在这样根本看不出来表达与否，就算表达了也不知道，更不用说蛋白是包涵体还是可溶性蛋白了。
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14楼2012-11-24 21:18:23
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xj0311

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

有包涵体，诱导浓度小些，温度低些，时间短些。还是建议摸一下条件
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15楼2012-11-25 08:30:05
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快乐棒棒糖

金虫 (初入文坛)
大家好，最近一直在摸索IPTG的浓度，诱导温度和时间，可是都没有什么进展，依然不能明显看出目的蛋白表达了。很着急，请各位大侠给予帮助啊。（温度：20度，25度，30度，37度）（IPTG浓度：0.4,0.6,0.8,1，1.2,1.5）（时间：3,5,6）
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16楼2012-12-15 21:24:32
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