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快乐棒棒糖

金虫 (初入文坛)

[求助] 原核表达

我最近在做原核表达,实验中出现很奇怪的现象(下面有图)。由于以前没有做过,希望大家给予帮助啊,谢谢大家啊。
(28摄氏度诱导了5个小时,目的蛋白没有诱导出来:15KD左右,Marker:10,15,25,35.。。。。)

20121121607.jpg
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hippo_li

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
11楼: Originally posted by 快乐棒棒糖 at 2012-11-24 11:13:40
我们上样用了20微升。一般情况下应该是多少啊?...

上样量跟你的蛋白浓度有关,之前有做过类似的实验能跑出条带吗?实验室其他人用相同的条件能跑出条带吗?没有的话可以点样的时候点几个不同体积或者稀释度的样品。我觉得你现在首先把胶跑好,再考虑优化表达条件的问题,现在这样根本看不出来表达与否,就算表达了也不知道,更不用说蛋白是包涵体还是可溶性蛋白了。
14楼2012-11-24 21:18:23
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你上的是全蛋白还是可溶蛋白?是用IPTG诱导的吗?话说回来,你的蛋白样品处理有问题啊,怎么是模糊一片的。可能胶也没有做太好。
2楼2012-11-22 13:32:07
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jiangyhai

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
胶没跑好,样品也没处理好。蛋白有没有表达尚不能判定。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

静心做事。
3楼2012-11-22 13:42:44
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快乐棒棒糖

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-22 13:32:07
你上的是全蛋白还是可溶蛋白?是用IPTG诱导的吗?话说回来,你的蛋白样品处理有问题啊,怎么是模糊一片的。可能胶也没有做太好。

是用IPTG诱导的全蛋白。我第一次做,是按照文献上的方法处理的蛋白样品。你们做原核表达有经验,能告诉我蛋白样品处理的具体过程吗?还有制胶的注意事项。谢谢啦!
4楼2012-11-23 18:56:29
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