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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达
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快乐棒棒糖

金虫 (初入文坛)

[求助] 原核表达

我最近在做原核表达，实验中出现很奇怪的现象（下面有图）。由于以前没有做过，希望大家给予帮助啊，谢谢大家啊。
（28摄氏度诱导了5个小时，目的蛋白没有诱导出来：15KD左右，Marker：10,15,25,35.。。。。）

20121121607.jpg
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1楼 2012-11-22 13:25:45
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by 快乐棒棒糖 at 2012-11-24 08:58:32
恩，知道了，谢谢啊。我查过一些资料和我做的同一种基因在不同的物种上好像都是包涵体沉淀，那我应该怎么做啊？...

如果你是想纯化目的蛋白，你可以直接收集纯化包涵体，然后复性。不过，有的蛋白复性效果不好。你也可以优化诱导条件，使其部分可溶。然后超声破碎细胞，从可溶部分纯化目的蛋白。
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12楼2012-11-24 12:28:55
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你上的是全蛋白还是可溶蛋白？是用IPTG诱导的吗？话说回来，你的蛋白样品处理有问题啊，怎么是模糊一片的。可能胶也没有做太好。
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2楼2012-11-22 13:32:07
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jiangyhai

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
胶没跑好，样品也没处理好。蛋白有没有表达尚不能判定。
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快乐棒棒糖
静心做事。
3楼2012-11-22 13:42:44
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快乐棒棒糖

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-22 13:32:07
你上的是全蛋白还是可溶蛋白？是用IPTG诱导的吗？话说回来，你的蛋白样品处理有问题啊，怎么是模糊一片的。可能胶也没有做太好。

是用IPTG诱导的全蛋白。我第一次做，是按照文献上的方法处理的蛋白样品。你们做原核表达有经验，能告诉我蛋白样品处理的具体过程吗？还有制胶的注意事项。谢谢啦！
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4楼2012-11-23 18:56:29
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