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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求各位帮我看看我用EDC连蛋白的步骤哪步有问题
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江户川哀

新虫 (小有名气)

[求助] 求各位帮我看看我用EDC连蛋白的步骤哪步有问题

我想用EDC和NHS把辣根过氧化氢酶（HRP）和鱼精蛋白（pro）连一起，但是折腾一个月了还没搞定，纠结死了，请各位大神帮我看看做的哪步有问题，先谢啦！

1.用将pbs调ph到6.3，后预试将10mlpbs用NaOH调到PH7.3知道NaOH的用量
2.在10ml 1mg/ml的HRP（ph6.3的pbs溶液）中加入EDC5mg，NHS6mg，避光混合15min。
3.加入巯基乙醇15ul终止反应
4.按预试，用NaOH将ph调到7.3
5.加入pro 4mg，室温反应2h
6.加入甘氨酸26mg终止反应。

我的基本是按Therme的说明书上的步骤来的，除了活化的步骤没用MES。第五步反应时间加到12h，温度调到4度的也试过，还是没连上。各位帮我看看哪步有问题，或有啥好的建议、方法，希望能不吝赐教。
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1楼 2012-11-21 23:49:01
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qicaisucceed

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
江户川哀: 金币+4 2012-11-27 16:05:20
以前将蛋白连到固相基片的COOH上用的浓度是，EDC40mg,NHS40mg，1ml水。8个小时左右内好用，超过这个时间就固定蛋白效果不好了。
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3楼2012-11-22 09:20:55
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悠悠落叶

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
江户川哀: 金币+4 2012-11-27 16:05:15
第二步和第五步反应时间太短，第五步怎么也得过夜吧
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索马鲁肽，利拉鲁肽，德谷胰岛素，InsulinIcodec胰岛素侧链，发酵索玛/利拉直链热卖
2楼2012-11-22 09:12:00
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qicaisucceed

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

以前将蛋白连到固相基片的COOH上用的浓度是，EDC40mg,NHS 5.8mg，1ml水。8个小时左右内好用，超过这个时间就固定蛋白效果不好了
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4楼2012-11-22 09:22:01
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江户川哀

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 悠悠落叶 at 2012-11-22 09:12:00
第二步和第五步反应时间太短，第五步怎么也得过夜吧

第五步过夜的我也试过，还是不行
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5楼2012-11-22 12:24:32
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