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求各位帮我看看我用EDC连蛋白的步骤哪步有问题
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我想用EDC和NHS把辣根过氧化氢酶（HRP）和鱼精蛋白（pro）连一起，但是折腾一个月了还没搞定，纠结死了，请各位大神帮我看看做的哪步有问题，先谢啦！ 1.用将pbs调ph到6.3，后预试将10mlpbs用NaOH调到PH7.3知道NaOH的用量 2.在10ml 1mg/ml的HRP（ph6.3的pbs溶液）中加入EDC5mg，NHS6mg，避光混合15min。 3.加入巯基乙醇15ul终止反应 4.按预试，用NaOH将ph调到7.3 5.加入pro 4mg，室温反应2h 6.加入甘氨酸26mg终止反应。 我的基本是按Therme的说明书上的步骤来的，除了活化的步骤没用MES。第五步反应时间加到12h，温度调到4度的也试过，还是没连上。各位帮我看看哪步有问题，或有啥好的建议、方法，希望能不吝赐教。 |
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