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江户川哀

新虫 (小有名气)

[求助] 求各位帮我看看我用EDC连蛋白的步骤哪步有问题

我想用EDC和NHS把辣根过氧化氢酶(HRP)和鱼精蛋白(pro)连一起,但是折腾一个月了还没搞定,纠结死了,请各位大神帮我看看做的哪步有问题,先谢啦!

1.用将pbs调ph到6.3,后预试将10mlpbs用NaOH调到PH7.3知道NaOH的用量
2.在10ml 1mg/ml的HRP(ph6.3的pbs溶液)中加入EDC5mg,NHS6mg,避光混合15min。
3.加入巯基乙醇15ul终止反应
4.按预试,用NaOH将ph调到7.3
5.加入pro 4mg,室温反应2h
6.加入甘氨酸26mg终止反应。

我的基本是按Therme的说明书上的步骤来的,除了活化的步骤没用MES。第五步反应时间加到12h,温度调到4度的也试过,还是没连上。各位帮我看看哪步有问题,或有啥好的建议、方法,希望能不吝赐教。
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悠悠落叶

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
江户川哀: 金币+4 2012-11-27 16:05:15
第二步和第五步反应时间太短,第五步怎么也得过夜吧
索马鲁肽,利拉鲁肽,德谷胰岛素,InsulinIcodec胰岛素侧链,发酵索玛/利拉直链热卖
2楼2012-11-22 09:12:00
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qicaisucceed

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
江户川哀: 金币+4 2012-11-27 16:05:20
以前将蛋白连到固相基片的COOH上用的浓度是,EDC40mg,NHS40mg,1ml水。8个小时左右内好用,超过这个时间就固定蛋白效果不好了。
3楼2012-11-22 09:20:55
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qicaisucceed

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

以前将蛋白连到固相基片的COOH上用的浓度是,EDC40mg,NHS 5.8mg,1ml水。8个小时左右内好用,超过这个时间就固定蛋白效果不好了
4楼2012-11-22 09:22:01
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江户川哀

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 悠悠落叶 at 2012-11-22 09:12:00
第二步和第五步反应时间太短,第五步怎么也得过夜吧

第五步过夜的我也试过,还是不行
5楼2012-11-22 12:24:32
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