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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为什么我的测序结果这么差，大家帮我看一下吧~
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seamas_gao1

银虫 (小有名气)

[求助] 为什么我的测序结果这么差，大家帮我看一下吧~

我要测一批序列，PCR完后直接送测（电泳条带很清晰、很亮），未纯化，未克隆，下面是宝生物给我先测了六个的测序结果，测序人员说结果非常不理想，大家帮我看看这是怎么回事吧，该怎么解决，谢谢！

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1楼 2012-11-20 13:14:50
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elbo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
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小丹木木: 金币+1, 同意楼主 2012-11-20 17:22:19
seamas_gao1: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-11-23 07:58:36
别想偷懒了，纯化，克隆吧
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2楼2012-11-20 14:14:50
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ohinnoway

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 同意哦 2012-11-20 17:22:31
seamas_gao1: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-11-23 07:58:47
是产物不纯吧，纯化后再测
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3楼2012-11-20 15:59:16
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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seamas_gao1: 金币+5, ★★★很有帮助, 十分感谢！ 2012-11-23 07:58:26
PCR产物即使纯化回收也可能是分子量相近的混合物，出现套峰并不稀奇。何况未纯化的PCR产物还有其他杂质。最好做克隆后再测序。
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4楼2012-11-21 07:52:50
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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seamas_gao1: 金币+2 2012-11-23 07:58:58
大家都已经告诉你了，建议克隆测序！
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生物化学与分子生物学
5楼2012-11-21 08:09:56
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wangqi1107

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
seamas_gao1: 金币+2 2012-11-23 07:59:04
直接纯化后连T载体，挑单克隆，检测正确，送菌液去测序，一般都不会出现这种叠峰什么的！！！
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6楼2012-11-21 08:34:35
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xj0311

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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seamas_gao1: 金币+2 2012-11-23 07:59:09
纯化克隆吧，偷懒耽误大事啊
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7楼2012-11-21 08:58:11
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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seamas_gao1: 金币+2 2012-11-23 07:59:14
PCR产物可以测序，需要看模板类型，基因组来源的模板就算了。
PCR产物测序前一定要纯化，用水溶解
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8楼2012-11-21 13:32:32
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zhengli123

金虫 (小有名气)
PCR产物最好是纯化后连接T载体然后在测序，否则大多数情况都会像你做的那样
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9楼2012-11-23 09:42:13
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2012continue

新虫 (小有名气)
只要有插入或缺失就有套峰，不管PCR产物多特异
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10楼2013-12-05 11:00:46
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