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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 如何提取HMGR
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juan_819

铁虫 (初入文坛)

[求助] 如何提取HMGR

请问：
      如何从植物中提取HMGR这个酶从而用以进行酶活测定？
     谢谢！
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1楼 2012-11-15 08:59:21
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by hzlatqh at 2013-07-08 10:55:07
哦，学习了，谢谢。

我还想问一下，我在一些文献看到测定hmgr活性的时候有人也会加一定量的DTT和/或EDTA，这又是为什么呢？...

DTT作用和巯基乙醇一致，但还原性较强，如果蛋白中同时具有还原性与氧化性基团，用巯基乙醇比较好。EDTA作用很可能是吸附一些可能干扰酶活的重金属离子。
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10楼2013-07-08 16:05:56
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普通回帖

starseacow

专家顾问 (职业作家)
上次传的文章楼主用不到？
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
2楼2012-11-15 18:13:24
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juan_819

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2012-11-15 18:13:24
上次传的文章楼主用不到？

有用的。文献主要讲的是测定方法，但是文献中都是直接就用酶蛋白了，我们这边本身是想等酶转化出来测酶活，那样就可以用文献里的方法了，不过现在没还没成功转化出来，所以没有现成的酶，现在想要直接从植物里把它提出来先测下看看。
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3楼2012-11-15 21:14:59
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
以前我是照这个方法做得
All enzymes assayed in this work were extracted from the
hairy roots with an extraction buffer of 50 mM Tris–HCl,
10 mM β-mercaptoethanol, 1% (w/v) polyvinylpyrrolidone
and pH7.5. The roots were ground in the extraction buffer
(1 g FW/mL) for 5 min with a pestle and mortar on ice,
followed by centrifugation at 14,000 rpm and 4°C for
30 min to obtain a solids-free extract. The protein content
was determined by the Bradford method using bovine
serum albumin as a standard.
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4楼2012-11-15 21:52:05
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juan_819

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by starseacow at 2012-11-15 21:52:05
以前我是照这个方法做得
All enzymes assayed in this work were extracted from the
hairy roots with an extraction buffer of 50 mM Tris–HCl,
10 mM β-mercaptoethanol, 1% (w/v) polyvinylpyrrolidone
a ...

谢谢啊······你也是做得这个吗？
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5楼2012-11-17 20:34:10
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starseacow

专家顾问 (职业作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by juan_819 at 2012-11-17 20:34:10
谢谢啊······你也是做得这个吗？...

以前做过
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6楼2012-11-17 21:07:31
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hzlatqh

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by starseacow at 2012-11-15 21:52:05
以前我是照这个方法做得
All enzymes assayed in this work were extracted from the
hairy roots with an extraction buffer of 50 mM Tris–HCl,
10 mM β-mercaptoethanol, 1% (w/v) polyvinylpyrrolidone
a ...

我是新手，问一下，为什么提取中要加β-mercaptoethanol这个还原性的物质？谢谢
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两个黄鹂鸣翠柳，一行白鹭上青天
7楼2013-07-08 00:16:50
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by hzlatqh at 2013-07-08 00:16:50
我是新手，问一下，为什么提取中要加β-mercaptoethanol这个还原性的物质？谢谢...

这也是参考其他文章获得的方法，原因我考虑为
1 在提取过程中少量巯基乙醇可以防止其他蛋白和目标蛋白之间由于二硫键的交联而发生污染
2 提取的蛋白如果存在自由巯基，最好加一点巯基乙醇以维持活性，如果蛋白只含有还原性基团，还可以选择还原性更强的DTT。
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8楼2013-07-08 01:00:50
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hzlatqh

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by starseacow at 2013-07-08 01:00:50
这也是参考其他文章获得的方法，原因我考虑为
1 在提取过程中少量巯基乙醇可以防止其他蛋白和目标蛋白之间由于二硫键的交联而发生污染
2 提取的蛋白如果存在自由巯基，最好加一点巯基乙醇以维持活性，如果蛋白只 ...

哦，学习了，谢谢。

我还想问一下，我在一些文献看到测定hmgr活性的时候有人也会加一定量的DTT和/或EDTA，这又是为什么呢？
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两个黄鹂鸣翠柳，一行白鹭上青天
9楼2013-07-08 10:55:07
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