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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » HPLC求助
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yaxing2009

银虫 (小有名气)

[求助] HPLC求助

请教各位：我现在检测的样品用乙腈和水为流动相，在进样之前样品在260nm处能检测到，同一波长处我乙腈和水作为流动相，保留时间在2min左右，接着我又通过降低乙腈比例来调整流动相极性，随着乙腈比例减小样品保留时间越来越大，当保留时间为10min时我停止摸索条件，用甲醇洗柱子，现在问题是我换了甲醇之后，立马有一个很大很尖的峰出现,而且峰型很好，请问这个峰有没有可能是我的样品峰啊，由于本人刚开始接触液相，还请各位前辈多多指教！谢谢！
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1楼 2012-11-14 16:43:36
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yumulin

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
没有标准品的话的确很难判断究竟是否你需要的峰。
你所提到的尖峰是否是换甲醇冲洗柱子时出的，洗柱子时出现的东西你不需要考虑的。
另外，摸索液相条件，一般都没有这么简单的，你的最后选取的乙腈水比例是多少，是等度的体系么？如果是这样，在你的10分钟后加入一个梯度缓慢升到高比例乙腈80%或90%，通过图谱判断你的样品中到底有多少成分
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7楼2012-11-14 23:54:24
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普通回帖

haha_bing

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
HPLC随着柱压、流动相的变化都会引起基线的波动，既然你用乙腈和水做流动相，能检测到样品峰，所以换甲醇后出现的峰应该不是样品峰
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2楼2012-11-14 16:53:31
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wm彼岸花

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有可能哦，开始摸条件时，时间可以加长点，例如2倍
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3楼2012-11-14 16:54:42
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yaxing2009

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by haha_bing at 2012-11-14 16:53:31
HPLC随着柱压、流动相的变化都会引起基线的波动，既然你用乙腈和水做流动相，能检测到样品峰，所以换甲醇后出现的峰应该不是样品峰

我现在有点怀疑之前的那个是不是我的样品峰 因为没有标准品 所以我不确定 唉纠结啊
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4楼2012-11-14 16:58:24
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haha_bing

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yaxing2009 at 2012-11-14 16:58:24
我现在有点怀疑之前的那个是不是我的样品峰 因为没有标准品 所以我不确定 唉纠结啊...

你的样品里有多种物质么？
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5楼2012-11-14 20:12:23
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yaxing2009

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by haha_bing at 2012-11-14 20:12:23
你的样品里有多种物质么？...

我过完柱子的 应该以一个为主 可能会含有少许杂质
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6楼2012-11-14 22:07:17
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yaxing2009

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by yumulin at 2012-11-14 23:54:24
没有标准品的话的确很难判断究竟是否你需要的峰。
你所提到的尖峰是否是换甲醇冲洗柱子时出的，洗柱子时出现的东西你不需要考虑的。
另外，摸索液相条件，一般都没有这么简单的，你的最后选取的乙腈水比例是多少， ...

是用甲醇冲柱子时出现的峰，我最后确定的乙腈-水的比例为35:65，当水为70时，没有峰出现，乙腈比例我从90%一直试到30%，出峰时间从1左右变到10分多，乙腈30%时没有峰出现，为了确定这个峰是否为样品峰，我又配了一个大浓度的，结果进样后电压明显增大，快要成为平头峰了，请问这样我能确定此峰就是我的样品峰了吗？谢谢！
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8楼2012-11-15 10:03:37
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小狼851226

木虫 (正式写手)
建议做一下液质，判断一下。
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9楼2012-11-15 10:07:10
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yaxing2009

银虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 小狼851226 at 2012-11-15 10:07:10
建议做一下液质，判断一下。

谢谢 呵呵 就是想摸完条件之后再去做LC-MS
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10楼2012-11-15 11:06:13
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