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yaxing2009

银虫 (小有名气)

[求助] HPLC求助

请教各位:我现在检测的样品用乙腈和水为流动相,在进样之前样品在260nm处能检测到,同一波长处我乙腈和水作为流动相,保留时间在2min左右,接着我又通过降低乙腈比例来调整流动相极性,随着乙腈比例减小样品保留时间越来越大,当保留时间为10min时我停止摸索条件,用甲醇洗柱子,现在问题是我换了甲醇之后,立马有一个很大很尖的峰出现,而且峰型很好,请问这个峰有没有可能是我的样品峰啊,由于本人刚开始接触液相,还请各位前辈多多指教!谢谢!
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yumulin

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
没有标准品的话的确很难判断究竟是否你需要的峰。
你所提到的尖峰是否是换甲醇冲洗柱子时出的,洗柱子时出现的东西你不需要考虑的。
另外,摸索液相条件,一般都没有这么简单的,你的最后选取的乙腈水比例是多少,是等度的体系么?如果是这样,在你的10分钟后加入一个梯度缓慢升到高比例乙腈80%或90%,通过图谱判断你的样品中到底有多少成分
7楼2012-11-14 23:54:24
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yumulin

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


karl2100: 金币+1, 谢谢! 2013-01-27 00:08:41
引用回帖:
8楼: Originally posted by yaxing2009 at 2012-11-15 10:03:37
是用甲醇冲柱子时出现的峰,我最后确定的乙腈-水的比例为35:65,当水为70时,没有峰出现,乙腈比例我从90%一直试到30%,出峰时间从1左右变到10分多,乙腈30%时没有峰出现,为了确定这个峰是否为样品峰,我又配了一 ...

因该是你的样品峰,因为随着浓度的增大而增大。如果你的样品不是那么贵的话,就以不同浓度地走个标曲呗。
另外,你的乙腈比例是很低的,要注意柱子残留污染的问题(你目标峰之外的物质),冲好柱子,否则可能出现做久了,重现性差的问题
15楼2012-11-16 14:52:35
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