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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » HPLC求助
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yaxing2009

银虫 (小有名气)

[求助] HPLC求助

请教各位：我现在检测的样品用乙腈和水为流动相，在进样之前样品在260nm处能检测到，同一波长处我乙腈和水作为流动相，保留时间在2min左右，接着我又通过降低乙腈比例来调整流动相极性，随着乙腈比例减小样品保留时间越来越大，当保留时间为10min时我停止摸索条件，用甲醇洗柱子，现在问题是我换了甲醇之后，立马有一个很大很尖的峰出现,而且峰型很好，请问这个峰有没有可能是我的样品峰啊，由于本人刚开始接触液相，还请各位前辈多多指教！谢谢！
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1楼 2012-11-14 16:43:36
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yumulin

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
没有标准品的话的确很难判断究竟是否你需要的峰。
你所提到的尖峰是否是换甲醇冲洗柱子时出的，洗柱子时出现的东西你不需要考虑的。
另外，摸索液相条件，一般都没有这么简单的，你的最后选取的乙腈水比例是多少，是等度的体系么？如果是这样，在你的10分钟后加入一个梯度缓慢升到高比例乙腈80%或90%，通过图谱判断你的样品中到底有多少成分
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7楼2012-11-14 23:54:24
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haha_bing

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
HPLC随着柱压、流动相的变化都会引起基线的波动，既然你用乙腈和水做流动相，能检测到样品峰，所以换甲醇后出现的峰应该不是样品峰
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2楼2012-11-14 16:53:31
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wm彼岸花

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有可能哦，开始摸条件时，时间可以加长点，例如2倍
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3楼2012-11-14 16:54:42
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yaxing2009

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by haha_bing at 2012-11-14 16:53:31
HPLC随着柱压、流动相的变化都会引起基线的波动，既然你用乙腈和水做流动相，能检测到样品峰，所以换甲醇后出现的峰应该不是样品峰

我现在有点怀疑之前的那个是不是我的样品峰 因为没有标准品 所以我不确定 唉纠结啊
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4楼2012-11-14 16:58:24
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