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yaxing2009

银虫 (小有名气)

[求助] HPLC求助

请教各位:我现在检测的样品用乙腈和水为流动相,在进样之前样品在260nm处能检测到,同一波长处我乙腈和水作为流动相,保留时间在2min左右,接着我又通过降低乙腈比例来调整流动相极性,随着乙腈比例减小样品保留时间越来越大,当保留时间为10min时我停止摸索条件,用甲醇洗柱子,现在问题是我换了甲醇之后,立马有一个很大很尖的峰出现,而且峰型很好,请问这个峰有没有可能是我的样品峰啊,由于本人刚开始接触液相,还请各位前辈多多指教!谢谢!
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yaxing2009

银虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by yumulin at 2012-11-14 23:54:24
没有标准品的话的确很难判断究竟是否你需要的峰。
你所提到的尖峰是否是换甲醇冲洗柱子时出的,洗柱子时出现的东西你不需要考虑的。
另外,摸索液相条件,一般都没有这么简单的,你的最后选取的乙腈水比例是多少, ...

是用甲醇冲柱子时出现的峰,我最后确定的乙腈-水的比例为35:65,当水为70时,没有峰出现,乙腈比例我从90%一直试到30%,出峰时间从1左右变到10分多,乙腈30%时没有峰出现,为了确定这个峰是否为样品峰,我又配了一个大浓度的,结果进样后电压明显增大,快要成为平头峰了,请问这样我能确定此峰就是我的样品峰了吗?谢谢!
8楼2012-11-15 10:03:37
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查看全部 18 个回答

haha_bing

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
HPLC随着柱压、流动相的变化都会引起基线的波动,既然你用乙腈和水做流动相,能检测到样品峰,所以换甲醇后出现的峰应该不是样品峰
2楼2012-11-14 16:53:31
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wm彼岸花

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
有可能哦,开始摸条件时,时间可以加长点,例如2倍
3楼2012-11-14 16:54:42
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yaxing2009

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by haha_bing at 2012-11-14 16:53:31
HPLC随着柱压、流动相的变化都会引起基线的波动,既然你用乙腈和水做流动相,能检测到样品峰,所以换甲醇后出现的峰应该不是样品峰

我现在有点怀疑之前的那个是不是我的样品峰 因为没有标准品 所以我不确定 唉纠结啊
4楼2012-11-14 16:58:24
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