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铁虫 (初入文坛)

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虫号: 2014234
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专业: 食品科学基础

[求助] 抗性淀粉测量的重现性

请教各位大侠，我最近做的是抗性淀粉的测定，用的是NDS来测，具体步骤
葡萄糖标准曲线的制作采用3,5-二硝基水杨酸法。分别精密吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1mL葡萄糖标准液(2.0 mg/mL)。对应的加入1、0.8、0. 6、0.4、0.2、0mL的蒸馏水，再分别加入2.0mL的DNS试剂，混匀后置于沸水浴中加热2 min进行显色，取出后立即冷却至室温，各加入蒸馏水9.0mL，摇匀后，静止2min在540 nm波长处测定光吸收值。以葡萄糖含量(mg/mL)为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。
莲子抗性淀粉的检测[ ]
粗提的莲子抗性淀粉样品，加入pH=6.0的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液，再加入过量α-淀粉酶（500 U/g），37℃下酶解16 h。用4 mol/L 的柠檬酸调节pH至4.0-4.5 加入过量葡萄糖淀粉酶（5000 U/L），60℃ 酶解1 h。然后将样品在4000 r/min 下离心10 min，弃上清液，用蒸馏水洗涤沉淀，离心，重复2次。在沉淀中加入5 mL 2 mol/L KOH，剧烈振荡30 min，使抗性淀粉充分溶解。用1 mol/L 的醋酸溶液调节pH至4.0-4.5，加入过量葡萄糖淀粉酶，60℃ 酶解1h。样品在4000 r/min 下离心10 min，收集上清液至100 mL 容量瓶中，用蒸馏水洗涤沉淀，离心，重复2次，合并上清液，最后定容。用DNS法[ ]测定其还原糖含量。

式中：W1—还原糖的含量，g
W2—莲子淀粉干基重量，g
可是我发现平行样一个测的是抗性淀粉为百分15左右，而另一个平行样几乎就没有，这是什么原因呢？还有抗性淀粉是在碱性条件下才会水解的，那之前酶解时间太长应该不会有太大影响吧。我想请教下大家我这种情况有可能是什么原因呢？还有就是有哪些因素会对我试验的稳定性造成影响？比如碱过量有关系吗？

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