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你们都测哪些指标
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| 做有关植物的毒理实验，大家一般都测哪些指标呢?感觉自己测的指标好少，我测抗氧化酶系（SOD/POD/CAT），MDA，还想测个超氧阴离子（O2-），大家觉着有没有必要呢，是不是和前面哪个指标重复？另外大家给我推荐几个植物常测的方法比较成熟的指标啊. |
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starseacow
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gyfgood: 金币+20, 为专家的博学与热心鼓掌！ 2012-11-08 23:29:33
gyfgood: 金币+20, 为专家的博学与热心鼓掌！ 2012-11-08 23:29:33
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上一个帖子可能讲得太笼统。估计楼主是想研究某种物质处理植物造成的一系列和ROS迸发相关的反应。关于ROS工作，前一段时间我分享过一篇文章，你可以看看 http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=4835328 关于测哪些指标，重点在于你要解决什么问题，指标测的再多，说明不了任何问题，那就是浪费时间精力。现在可以说几乎所有外界刺激与损伤，都会引起ROS迸发，抗氧化酶系活性变化，那么你单纯测这些东西说实话没意义，就算发文章也顶多是灌水的水平。举个好文章的例子： Arabidopsis Nitric Oxide Synthase 1 Is Targeted to Mitochondria and Protects against Oxidative Damage and Dark-Induced Senescence Fang-Qing Guo and Nigel M. Crawford The Plant Cell December 2005 vol. 17 no. 12 3436-3450 这篇文章研究了线粒体NOS1对刺激的反应，以及NOS1带来的NO与ROS迸发的关系，并没有罗列一大堆各种各样抗氧化指标，而是为了证明自己的观点，认真的选取公认可信的方法，做出漂亮可信的结果。这样的工作解决问题，完整的讲了一个故事，所以可以发到顶级杂志。咱们现在做的工作离plant cell可能很遥远，但至少可以从想法和研究思路上向他们看齐。 我看过也解答过很多楼主的帖子，感觉你尝尝纠结于一些很细节的实验问题，这很可能是由于你所在实验组没有支持你的条件，可以理解，深表同情，我也愿意尽可能帮你解决这些问题。但我感觉更重要的是你需要对自己的课题有更深入和全面的思考，在研究到底怎么做某些实验之前，更重要的是明白你的课题涉及哪些内容，目前的最新研究进展是什么，有哪些问题还没有答案，自己如果要回答这些问题要怎么做等等。 |
3楼2012-11-05 18:41:06
starseacow
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2楼2012-11-05 17:02:35
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感谢你一直以来对我的帮助，我也发现了只要我发帖子一般都是等你来回答  ，感觉你挺厉害的。我的实验做的也挺纠结的，各种不会各种不明白，大学知识全白学了现在一点用不上，等于从头再来，老师给我定的课题又是我们实验室的先例，我是带头做的对我期望很大，师哥师姐不做这方面也没法帮我，更是难上加难，目前书上有的常规指标测的马马虎虎还算过关，老板就老是纠结于ROS和彗星实验上，因为他觉着这是我们实验室的特色。彗星太难了，小麦，单子叶植物，想取细胞核来做彗星，我就看过两篇文献，但一篇是培养的愈伤组织，还有一篇是直接养的小麦做的，而且作者是我以前的师哥，我现在天天联系他问，最后他都怕了，把博士论文发给我说：我真不记得当时怎么做的了你自己好好看看我的论文吧，而且一直劝我换指示生物，但是这是我们老师的国家自然基金的课题定的没法换。ROS我也了解了一些，最常用的就是DCFH-DA，而且我们实验室做动物的也是用这个方法，仪器软件啥的都准备好了，那个什么激光共聚焦显微镜我都没见过。。。，所以我研究了下他们动物的方法原理，感觉就是取线粒体再加探针最好能测荧光强度。我按这方法来试验了下，取植物线粒体再加探针测，试验阶段很成功，我以为行了，但是正式实验就出问题了，有的处理组没数据或很小，最近又试了好多次都不行，就是想不明白哪有问题，觉着是叶绿体影响了荧光强度，或者我没取到线粒体，但是以前就是这么做的。。我又用根尝试做，又有数据了，但是我前面指标全是用叶测的，这个用根测老板说不行。现在我就一直纠结于这两个指标，所以就想到了用其他指标代替。你推荐给我的这篇文章我看过，我觉着测O2-和测SOD是重复的，测H2O2和测CAT时重复的，所以想测个总的ROS，这种想法对不对? 另外我刚看了一篇文献测拟南芥ROS就是加探针测荧光强度，不知道你看过没？The alternative oxidase lowers mitochondrial reactive oxygen production in plant cells. DENIS P. MAXWELL*, YONG WANG*, AND LEE MCINTOSH但是文献太笼统了，我老是从文献中学不到啥。 还有一点不明白的是，我看用DCFH-DA测ROS老提到什么六孔板什么的，感觉虽然都是用DCFH-DA法测的具体步骤也是不一样的。我们都是直接提取线粒体，计算蛋白，根据蛋白量确定加的线粒体酶液量，最后再以每毫克蛋白的荧光强度表示结果来表明ROS的量。你要是感兴趣的话我可以告诉你这个方法的具体，顺便也帮我研究下这个方法，看我的思路是否可靠？我们师哥用这方法刚发了一篇文章，关于斑马鱼的，在Aquatic Toxicology上，题目是Effects of the ionic liquid [Omim]PF6 on antioxidant enzyme systems, ROS and DNA damage in zebrafish (Danio rerio)你有兴趣可以看下。 |
4楼2012-11-05 19:50:02
starseacow
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a71840584: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-11-09 23:14:40
a71840584: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-11-09 23:14:40
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动物的方法是否可以直接用在植物上，很难说。你的问题，很显然是叶绿体影响，这也就是为什么根做出来而叶子不行。关于活性氧迸发，测定各种活性氧和测定抗氧化酶是两个概念，不能互相替代。不同活性氧存在一定的相互转化，因为他们处于一个代谢系统内，同时，不同活性氧也有不同的信号作用，譬如我以前做过的工作显示某种次生代谢产物只受到H2O2调控，超氧和羟自由基并不影响。（当然，是否都要测定取决于你的实验目的，我以前搞次生代谢做活性氧，几个指标都测过，现在的组做活性氧，就考虑一个H2O2，照样出好文章。） 关于实验方法，我还是建议你使用别的做植物的文献上有报道的，且大家都用的方法。PNAS的方法讲得还算详细啊，有什么看不懂的？ |
5楼2012-11-05 21:15:50
