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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 你们都测哪些指标
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a71840584

金虫 (正式写手)

[求助] 你们都测哪些指标

做有关植物的毒理实验，大家一般都测哪些指标呢?感觉自己测的指标好少，我测抗氧化酶系（SOD/POD/CAT），MDA，还想测个超氧阴离子（O2-），大家觉着有没有必要呢，是不是和前面哪个指标重复？另外大家给我推荐几个植物常测的方法比较成熟的指标啊.
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1楼 2012-11-05 16:21:11
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starseacow

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感谢参与，应助指数 +1
看你要解决什么问题来决定选择哪些指标，看见别人做什么，就找一堆指标测，发不出好文章的。楼主最好认真读几篇相关内容别人做的好文章，确定实验目的，在看需要哪些指标支持自己的研究。
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2楼2012-11-05 17:02:35
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starseacow

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
gyfgood: 金币+20, 为专家的博学与热心鼓掌！ 2012-11-08 23:29:33
上一个帖子可能讲得太笼统。估计楼主是想研究某种物质处理植物造成的一系列和ROS迸发相关的反应。关于ROS工作，前一段时间我分享过一篇文章，你可以看看
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=4835328

关于测哪些指标，重点在于你要解决什么问题，指标测的再多，说明不了任何问题，那就是浪费时间精力。现在可以说几乎所有外界刺激与损伤，都会引起ROS迸发，抗氧化酶系活性变化，那么你单纯测这些东西说实话没意义，就算发文章也顶多是灌水的水平。举个好文章的例子：
Arabidopsis Nitric Oxide Synthase 1 Is Targeted to Mitochondria and Protects against Oxidative Damage and Dark-Induced Senescence
Fang-Qing Guo and Nigel M. Crawford
The Plant Cell December 2005 vol. 17 no. 12 3436-3450

这篇文章研究了线粒体NOS1对刺激的反应，以及NOS1带来的NO与ROS迸发的关系，并没有罗列一大堆各种各样抗氧化指标，而是为了证明自己的观点，认真的选取公认可信的方法，做出漂亮可信的结果。这样的工作解决问题，完整的讲了一个故事，所以可以发到顶级杂志。咱们现在做的工作离plant cell可能很遥远，但至少可以从想法和研究思路上向他们看齐。

我看过也解答过很多楼主的帖子，感觉你尝尝纠结于一些很细节的实验问题，这很可能是由于你所在实验组没有支持你的条件，可以理解，深表同情，我也愿意尽可能帮你解决这些问题。但我感觉更重要的是你需要对自己的课题有更深入和全面的思考，在研究到底怎么做某些实验之前，更重要的是明白你的课题涉及哪些内容，目前的最新研究进展是什么，有哪些问题还没有答案，自己如果要回答这些问题要怎么做等等。
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3楼2012-11-05 18:41:06
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★ ★
a71840584: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-11-09 23:14:40
动物的方法是否可以直接用在植物上，很难说。你的问题，很显然是叶绿体影响，这也就是为什么根做出来而叶子不行。关于活性氧迸发，测定各种活性氧和测定抗氧化酶是两个概念，不能互相替代。不同活性氧存在一定的相互转化，因为他们处于一个代谢系统内，同时，不同活性氧也有不同的信号作用，譬如我以前做过的工作显示某种次生代谢产物只受到H2O2调控，超氧和羟自由基并不影响。（当然，是否都要测定取决于你的实验目的，我以前搞次生代谢做活性氧，几个指标都测过，现在的组做活性氧，就考虑一个H2O2，照样出好文章。）
关于实验方法，我还是建议你使用别的做植物的文献上有报道的，且大家都用的方法。PNAS的方法讲得还算详细啊，有什么看不懂的？
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5楼2012-11-05 21:15:50
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6楼: Originally posted by a71840584 at 2012-11-06 23:02:50
嗯，他这一段Detection of Reactive Oxygen Species. Spectrofluorometry.
Intracellular production of ROS was measured by using 29,79-
dichlorof luorescein diacetate (H2DCF-DA; Molecular
Probes). Thi ...

文章关于方法第一节就写着

Plant Material and Growth Conditions.
Cultured tobacco cells (Nicotiana tabacum cv. Petit Havana SR1) containing Aox1 in either sense (S11) or antisense (AS8) orientation have been characterized (9, 10). All experiments were conducted with exponentially growing cells 3–4 days after subculture

结果部分，测定ROS的图
Figure 1 Intracellular ROS abundance in WT and Aox1 transgenic cultured tobacco cells.
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7楼2012-11-07 00:25:13
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6楼: Originally posted by a71840584 at 2012-11-06 23:02:50
嗯，他这一段Detection of Reactive Oxygen Species. Spectrofluorometry.
Intracellular production of ROS was measured by using 29,79-
dichlorof luorescein diacetate (H2DCF-DA; Molecular
Probes). Thi ...

文献做法，不受叶绿体影响，在整个过程中没有对细胞的破碎，探针可以自己进入细胞内部。
关于ROS表示，我以前用每克鲜重植物来表示，照文章上来也可以。
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8楼2012-11-07 00:28:00
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9楼: Originally posted by a71840584 at 2012-11-07 21:51:44
我就是这没看懂啊，什么叫继代培养后以指数形式生长3-4天的细胞？他是培养的愈伤组织？我是直接水培的小麦啊，在营养液里加有毒物质染毒，我再怎么培养愈伤组织？...

这篇文章中用的就是烟草悬浮细胞，如何获得该细胞你需要看看列出的参考文献。读文章需要多动动脑子，这篇文章中给出了使用探针测ROS的方法，你需要根据这个方法用在自己的实验中，而不是让你一步步照做。关于你的实验问题，我的观点还是你最好直接加载探针，用荧光显微镜拍照，这样可以直接获得关于叶片ROS产生的结果。
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11楼2012-11-07 22:29:37
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10楼: Originally posted by a71840584 at 2012-11-07 21:57:10
没有对细胞破碎？意思是取完整的细胞？如何取？以每克鲜重表示也行啊，我可以取0.5g小麦叶片去测荧光强度，最后结果再乘以2就是了，问题是我这0.5g小麦叶片怎么用来测ROS？有了叶片怎么处理才能加探针？我以前都是 ...

楼主确实没读懂文章中方法，不知是否通读了全文，最好还是认真看看，PNAS那篇文章算是很经典的，就算不能直接照搬方法，一些读数据的分析和处理也值得学习。
就我感觉你的方法并不合适，对于植物材料，不能研磨碎了以后再加载探针检测，叶绿体及其他植物细胞成分会影响你的结果。你如果没有荧光显微镜之类的仪器，那还不如干脆就用传统方法测H2O2，超氧和羟自由基，也可以反应ROS产生。

说句题外话，楼主确实是做植物的新手啊，而且所在实验室似乎也从来没做过相关工作，很不明白为什么你的导师会给你这样的项目。
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12楼2012-11-07 22:34:37
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14楼: Originally posted by a71840584 at 2012-11-08 00:15:55
悬浮细胞？悬浮细胞一般都是和培养愈伤组织挂钩吧，而起文献还说指数生长的细胞更像是在培养愈伤组织了。另外取单细胞有机械法和酶解法，据我所知这两种方法对单子叶植物都不怎么适合，大哥做ROS取啥细胞？...

不同实验根据目的需要选择不同的实验材料，有的是植物叶片，有点是发根或愈伤，还有的做悬浮细胞。文章是用悬浮细胞做材料研究ROS的，不代表你也需要把小麦叶片搞成悬浮细胞去做，那样纯粹多此一举，而且很麻烦。ROS在叶片和悬浮细胞里都可以用探针测。
楼主需要的就是找一个合适的方法，那篇PNAS文章给出了用探针测的基本方法，你需要根据这个设计适合小麦叶片的。楼主去查查别人怎么用探针测叶片ROS迸发的文章吧。没有荧光显微镜就用传统方法测ROS吧。
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15楼2012-11-08 00:38:01
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16楼: Originally posted by a71840584 at 2012-11-08 08:50:34
大哥我感觉我们的问题又回到原点了，虽然又对ROS的知识了解了一大圈，但是。。。我的问题，用叶片测ROS如何进行？我至今没找到篇像样的用叶片测ROS的文章，即使找到了我也不见得能理解吸收转为己用。。，我 ...

说句不太礼貌的话，我实在不知道你是怎么查的文章。用探针测量叶片ROS迸发的文章非常多，这已经是很常见的试验了，google学术上查查就有
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Analysis of reactive oxygen species in the guard cell of wheat stoma with confocal microscope
Microscopy Research and Technique
Volume 74, Issue 9, pages 795–798, September 2011
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19楼: Originally posted by a71840584 at 2012-11-08 23:44:09
没事我承认我水平确实有点次，不论是查英文文献还说阅读英文文献，其实我来这就是想找个完整点的方案，就像测SOD、MDA那样方法很固定的，包括试剂，植物组织前处理，测定。。。，不想懂太多，能做出来结果就 ...

看看我列的第一篇文章吧
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