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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 你们都测哪些指标
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starseacow

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【答案】应助回帖

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9楼: Originally posted by a71840584 at 2012-11-07 21:51:44
我就是这没看懂啊，什么叫继代培养后以指数形式生长3-4天的细胞？他是培养的愈伤组织？我是直接水培的小麦啊，在营养液里加有毒物质染毒，我再怎么培养愈伤组织？...

这篇文章中用的就是烟草悬浮细胞，如何获得该细胞你需要看看列出的参考文献。读文章需要多动动脑子，这篇文章中给出了使用探针测ROS的方法，你需要根据这个方法用在自己的实验中，而不是让你一步步照做。关于你的实验问题，我的观点还是你最好直接加载探针，用荧光显微镜拍照，这样可以直接获得关于叶片ROS产生的结果。
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11楼2012-11-07 22:29:37
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starseacow

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【答案】应助回帖

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10楼: Originally posted by a71840584 at 2012-11-07 21:57:10
没有对细胞破碎？意思是取完整的细胞？如何取？以每克鲜重表示也行啊，我可以取0.5g小麦叶片去测荧光强度，最后结果再乘以2就是了，问题是我这0.5g小麦叶片怎么用来测ROS？有了叶片怎么处理才能加探针？我以前都是 ...

楼主确实没读懂文章中方法，不知是否通读了全文，最好还是认真看看，PNAS那篇文章算是很经典的，就算不能直接照搬方法，一些读数据的分析和处理也值得学习。
就我感觉你的方法并不合适，对于植物材料，不能研磨碎了以后再加载探针检测，叶绿体及其他植物细胞成分会影响你的结果。你如果没有荧光显微镜之类的仪器，那还不如干脆就用传统方法测H2O2，超氧和羟自由基，也可以反应ROS产生。

说句题外话，楼主确实是做植物的新手啊，而且所在实验室似乎也从来没做过相关工作，很不明白为什么你的导师会给你这样的项目。
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12楼2012-11-07 22:34:37
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a71840584

金虫 (正式写手)
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12楼: Originally posted by starseacow at 2012-11-07 22:34:37
楼主确实没读懂文章中方法，不知是否通读了全文，最好还是认真看看，PNAS那篇文章算是很经典的，就算不能直接照搬方法，一些读数据的分析和处理也值得学习。
就我感觉你的方法并不合适，对于植物材料，不能研磨碎 ...

何止是新啊太新了，老师就是想让我开个头做植物呢，我的专业是环境。。，这都哪跟哪啊，现在用的知识基本都是高中生物还没忘的。我想问下你们做ROS不是取悬浮细胞吗?悬浮细胞只有培养的愈伤组织才能提取到吧？都长好的叶片器官取细胞不大容易吧，真能取到细胞的话我另一个难题说不定都能解决了。我们这有倒置荧光显微镜能用在ROS上吗？大哥还是教教我怎么用植物叶片取悬浮细胞吧。。。
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再牛逼的肖邦也弹不出哥的忧伤。。。
13楼2012-11-08 00:02:53
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a71840584

金虫 (正式写手)
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11楼: Originally posted by starseacow at 2012-11-07 22:29:37
这篇文章中用的就是烟草悬浮细胞，如何获得该细胞你需要看看列出的参考文献。读文章需要多动动脑子，这篇文章中给出了使用探针测ROS的方法，你需要根据这个方法用在自己的实验中，而不是让你一步步照做。关于你的实 ...

悬浮细胞？悬浮细胞一般都是和培养愈伤组织挂钩吧，而起文献还说指数生长的细胞更像是在培养愈伤组织了。另外取单细胞有机械法和酶解法，据我所知这两种方法对单子叶植物都不怎么适合，大哥做ROS取啥细胞？
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再牛逼的肖邦也弹不出哥的忧伤。。。
14楼2012-11-08 00:15:55
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starseacow

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【答案】应助回帖

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14楼: Originally posted by a71840584 at 2012-11-08 00:15:55
悬浮细胞？悬浮细胞一般都是和培养愈伤组织挂钩吧，而起文献还说指数生长的细胞更像是在培养愈伤组织了。另外取单细胞有机械法和酶解法，据我所知这两种方法对单子叶植物都不怎么适合，大哥做ROS取啥细胞？...

不同实验根据目的需要选择不同的实验材料，有的是植物叶片，有点是发根或愈伤，还有的做悬浮细胞。文章是用悬浮细胞做材料研究ROS的，不代表你也需要把小麦叶片搞成悬浮细胞去做，那样纯粹多此一举，而且很麻烦。ROS在叶片和悬浮细胞里都可以用探针测。
楼主需要的就是找一个合适的方法，那篇PNAS文章给出了用探针测的基本方法，你需要根据这个设计适合小麦叶片的。楼主去查查别人怎么用探针测叶片ROS迸发的文章吧。没有荧光显微镜就用传统方法测ROS吧。
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15楼2012-11-08 00:38:01
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a71840584

金虫 (正式写手)
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15楼: Originally posted by starseacow at 2012-11-08 00:38:01
不同实验根据目的需要选择不同的实验材料，有的是植物叶片，有点是发根或愈伤，还有的做悬浮细胞。文章是用悬浮细胞做材料研究ROS的，不代表你也需要把小麦叶片搞成悬浮细胞去做，那样纯粹多此一举，而且很麻烦。R ...

大哥我感觉我们的问题又回到原点了，虽然又对ROS的知识了解了一大圈，但是。。。我的问题，用叶片测ROS如何进行？我至今没找到篇像样的用叶片测ROS的文章，即使找到了我也不见得能理解吸收转为己用。。，我也设计了直接测植物器官里ROS的方法啊，叶不行，根行，关键是我就要用叶，大哥说做ROS的就没用叶什么的器官测过ROS吗？
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再牛逼的肖邦也弹不出哥的忧伤。。。
16楼2012-11-08 08:50:34
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a71840584

金虫 (正式写手)
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15楼: Originally posted by starseacow at 2012-11-08 00:38:01
不同实验根据目的需要选择不同的实验材料，有的是植物叶片，有点是发根或愈伤，还有的做悬浮细胞。文章是用悬浮细胞做材料研究ROS的，不代表你也需要把小麦叶片搞成悬浮细胞去做，那样纯粹多此一举，而且很麻烦。R ...

我以前看过一篇测其他植物叶子ROS的英文文献，有几个地方不太明白想向你请教下。
1.我看的那篇文献说要加KCN和SHAM，干嘛的？有什么用？测ROS的都加吗？你们也加吗？我以前看的文献都没加的就这篇加。
2.文献说要homogenized and thawed，意思是不是研磨啊？还有Freeze thawing was repeated at least thrice是啥意思研磨3次？
3.加了探针后要孵育30min，怎么孵育？需要水浴吗？我们现在都是37℃水浴20min。
4.离心中有9000x(上面写的不是乘号是埃克斯)g离心，是不是意思就是9000g离心？
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17楼2012-11-08 10:55:08
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16楼: Originally posted by a71840584 at 2012-11-08 08:50:34
大哥我感觉我们的问题又回到原点了，虽然又对ROS的知识了解了一大圈，但是。。。我的问题，用叶片测ROS如何进行？我至今没找到篇像样的用叶片测ROS的文章，即使找到了我也不见得能理解吸收转为己用。。，我 ...

说句不太礼貌的话，我实在不知道你是怎么查的文章。用探针测量叶片ROS迸发的文章非常多，这已经是很常见的试验了，google学术上查查就有
Betacyanin synthesis in red beet (Beta vulgaris) leaves induced by wounding and bacterial infiltration is preceded by an oxidative burst
Physiological and Molecular Plant Pathology
Volume 64, Issue 3, March 2004, Pages 125–133

Analysis of reactive oxygen species in the guard cell of wheat stoma with confocal microscope
Microscopy Research and Technique
Volume 74, Issue 9, pages 795–798, September 2011
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18楼2012-11-08 17:13:14
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a71840584

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18楼: Originally posted by starseacow at 2012-11-08 17:13:14
说句不太礼貌的话，我实在不知道你是怎么查的文章。用探针测量叶片ROS迸发的文章非常多，这已经是很常见的试验了，google学术上查查就有
Betacyanin synthesis in red beet (Beta vulgaris) leaves induced by wo ...

没事我承认我水平确实有点次，不论是查英文文献还说阅读英文文献，其实我来这就是想找个完整点的方案，就像测SOD、MDA那样方法很固定的，包括试剂，植物组织前处理，测定。。。，不想懂太多，能做出来结果就行，反正将来也不干这行，现在老师交给我任务了我就想尽力完成，像仁兄你这样懂这么多的现在确实不多都是比着葫芦画个瓢，学术不好搞啊不感兴趣
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再牛逼的肖邦也弹不出哥的忧伤。。。
19楼2012-11-08 23:44:09
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19楼: Originally posted by a71840584 at 2012-11-08 23:44:09
没事我承认我水平确实有点次，不论是查英文文献还说阅读英文文献，其实我来这就是想找个完整点的方案，就像测SOD、MDA那样方法很固定的，包括试剂，植物组织前处理，测定。。。，不想懂太多，能做出来结果就 ...

看看我列的第一篇文章吧
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20楼2012-11-09 03:17:41
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