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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 基因引物与内参引物
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Road2011

银虫 (小有名气)

[求助] 基因引物与内参引物

做qRT-PCR时，1.目的基因引物是25base,根据估计是191bp,试用于做qRT-PCR不？2.内参引物选择20base的B-actin与选择25base的GAPDH,影响不？现在已经买了20base的B-actin，不知道能用不？
谢谢
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1楼 2012-11-05 11:06:06
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Road2011

银虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
12楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-08 14:38:26
如果有可能的话最好相差更少一些。这样也不是不可以做，只是对结果稍微有点影响。重选一对引物也不是什么难事吧。...

一般相差多少范围之内是更好呢？
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13楼2012-11-09 09:00:14
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
Road2011: 金币+1, ★★★很有帮助, 谢谢 2012-11-05 14:50:58
退火温度怎么样？合成的引物做过溶解曲线，扩增效率等的检测吗？上机器试一下
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jiayoubashaonian
2楼2012-11-05 11:15:04
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Road2011: 金币+1, ★★★很有帮助, 谢谢 2012-11-05 15:26:04
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-11-06 17:20:34
目的基因引物和内参引物的退火温度要大致相同以便同时检测。还有就是扩增片段大小最好也大致一样保证反转录时的效率相同。最重要的是，引物不形成稳定的二级结构和引物二聚体。
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3楼2012-11-05 13:48:45
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Road2011

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by blackrose8089 at 2012-11-05 11:15:04
退火温度怎么样？合成的引物做过溶解曲线，扩增效率等的检测吗？上机器试一下

B-actin引物是买回来的，测qRT-PCR时候的CT值大约是20oC。扩增效率怎么检测啊？谢谢
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4楼2012-11-05 14:50:35
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