| 查看: 1872 | 回复: 9 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
blue native ，SDS0-PAGE双向电泳
|
||
我提取取得类囊体膜，应该加什么样品缓冲液,如何才能长期保存用于下游的blue native。跑完blue-native，再跑SDS-PAGE双向电泳银染后，胶该如何保存长期以便上质谱打点（因为上质谱需要排队，可怜呀。。。 ）。 |
回复此楼» 猜你喜欢
新审查指南堵死了"一案双申"的老路，实用新型和发明只能二选一了？
已经有27人回复
-
课题快结题了才发现没东西可申请专利？四个维度帮你挖一挖
已经有22人回复
-
植物学论文润色/翻译怎么收费?
已经有202人回复
-
论文投出去之前到底要不要先申请专利？被审稿周期坑过一次后的复盘
已经有8人回复
-
横向课题结题时企业突然问专利归谁，合同里没约定的话默认算谁的？
已经有22人回复
-
教师节聊点实在的：很多老师的专利正在悄悄失效
已经有21人回复
-
第一次独立答复专利审查意见，才发现这活跟毕业答辩是一个套路
已经有24人回复
-
使用QE质谱仪检测杂质含量
已经有0人回复
-
帮学院整理搁置专利清单时发现一半快到年费期，聊聊几条盘活的路子
已经有18人回复
-
师弟论文见刊大半年才想起来申请专利，还能抢救一下吗？
已经有4人回复
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
5楼2012-11-04 03:34:23
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyfgood: 金币+5, 很好的回答！ 2012-11-02 23:33:11
swj11123: 金币+25, ★★★很有帮助, thank you 2012-11-03 11:28:13
感谢参与，应助指数 +1
gyfgood: 金币+5, 很好的回答！ 2012-11-02 23:33:11
swj11123: 金币+25, ★★★很有帮助, thank you 2012-11-03 11:28:13
| 提的内囊体膜定量后分装，液氮冻，保存在-80°C，尽量不要反复冻化。做BN-PAGE时取出，冰上操作，增溶上样。双向电泳的胶短期保存在水里，当然容易污染和损坏。长期保存可以制成干胶。需要做质谱时用刀挖点，rehydrate后可以进一步蛋白酶消化上质谱。 |
3楼2012-11-02 12:14:34
4楼2012-11-03 11:32:30
|
以下是我提取类囊体膜的方法，但我不知道他最终的得到的类囊体膜-80度保存前是在islation buffer 重悬保存还是直接用沉淀保存 10g叶片用ＰＢＳ缓冲液（１３７ｍＭ的ＮａＣｌ，２.７ｍＭ ＫＣｌ，１０ｍＭ Ｎａ２ＨＰＯ３，２ｍＭ ＫＨ２ＰＯ３，ＰＨ ７．４）浸洗后，剪成碎片，加入３倍体积预冷的isolation buffer（ＰＢＳ缓冲液＋３３０ｍＭ蔗糖），用预冷的杵和研钵研成匀浆。匀浆液通过两层尼龙布过滤，２０００ｇ,4°C，离心5min。弃去上清液，沉淀用isolation buffer重悬。重悬液500g，4°C离心20s,去除沉淀。上清液2000g, 4°C，离心5min.所得沉淀即为叶绿体沉淀。叶绿体沉淀重悬于isolation buffer以便进行低渗溶胀后，3000g, 4°C，离心10min以分离得到类囊体膜沉淀。得到的类囊体膜沉淀要么立即使用，或者是在液N2冷冻后分装在-80°C后备用。叶绿体含量用80%丙酮法-分光光度计法测定测定。 |
6楼2012-11-04 09:29:16
