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水蓝儿907

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白酶的提取

急需!!! 想要问大家一下:
                 从水产品中提取蛋白酶的方法?
                 提取之前是否还需要进行脱脂?脱脂的作用?
                 丙酮沉淀法的具体步骤?
                 酶活若很低的话如何改进?及低酶活的应用?
  

     谢谢大家!!!
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想起你,嘴角,只需微微上扬
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roydxy

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
首先细胞破碎,使目的蛋白溶解于缓冲液中
第二步,用硫酸铵,或者有机溶剂(如乙醇、丙酮)等沉淀蛋白——也包括核酸等大分子
第三步,收取沉淀并复溶,用硫酸铵沉淀的需要透析,用有机溶剂沉淀的需初步净化(如硅藻土过滤,微膜过滤等),然后就获得了粗酶。

丙酮现在已不提倡使用的了。乙醇的效果差不多,最好别用丙酮。

提蛋白酶前,我的意见是不用脱脂,否则会导致酶活的降低。

若是酶活很低,有多种情况:如细胞破碎不完全、提取效率低、酶在提取过程中失活等,需要具体情况具体分析

祝:顺利
2楼2012-10-29 09:20:28
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gezilin1862

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
好多教材上都有关于酶的分离纯化的内容,一般按传统的方法做,至于酶活很低,那是不是要考虑它的浓缩。
每一天当最后一天。
3楼2012-10-29 17:31:14
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