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zhangyehong

新虫 (初入文坛)

[求助] 有关疏水层析的问题

求助,我近期从发酵液中分离脂肪酶,过完离子柱后,过疏水层析,用的是GE akta系统,疏水预装柱,洗脱液用的是10%的硫酸铵和磷酸缓冲液,但是上样后,硫酸铵洗出了一个大峰,但是后来用缓冲液洗不下来目的蛋白,因为我的样品有颜色,所以从柱子上看到样品还挂在柱子上,不知道什么原因,想求助一高手,实在没辙了,希望和纯化蛋白的高手交流交流。

[ Last edited by wizardfan on 2012-10-25 at 07:36 ]
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zhangyehong

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by dshlove at 2012-10-23 09:06:25
疏水柱是要高盐上样低盐洗脱。
所以最大的洗脱buffer就是水了。用水洗看看能不能洗出来。

就是水也洗不下来,最后只能用NaOH了
9楼2012-10-24 20:09:48
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ynkuaile

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你蛋白有辅酶或辅基吗?蛋白的颜色是辅酶或辅基的颜色吗?如果没有辅酶,那么换低盐溶液梯度洗脱,或换个低浓度的盐上样,或换个弱一点的疏水柱;如果有辅酶或辅基,那就是辅酶与蛋白分离了。实验顺利。

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2楼2012-10-22 17:03:39
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用水洗用水洗用水洗用水洗
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
3楼2012-10-22 18:17:29
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yongbo_liang

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
看天: 金币+3, 鼓励回答 2012-10-30 16:09:22
如果没洗脱下来,就说明你的蛋白的极性很弱,那么你就要用极性很弱的溶液来洗脱你的目的蛋白
如果不行的话,说明有可能你的蛋白在柱子上有聚集或沉淀,你也可以尝试加点非极性表面活性剂洗脱一下。
4楼2012-10-23 08:24:59
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