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[求助]
有关疏水层析的问题
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求助，我近期从发酵液中分离脂肪酶，过完离子柱后，过疏水层析，用的是ＧＥ ａｋｔａ系统，疏水预装柱，洗脱液用的是１０％的硫酸铵和磷酸缓冲液，但是上样后，硫酸铵洗出了一个大峰，但是后来用缓冲液洗不下来目的蛋白，因为我的样品有颜色，所以从柱子上看到样品还挂在柱子上，不知道什么原因，想求助一高手，实在没辙了，希望和纯化蛋白的高手交流交流。 [ Last edited by wizardfan on 2012-10-25 at 07:36 ] |
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ynkuaile
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【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
| 你蛋白有辅酶或辅基吗？蛋白的颜色是辅酶或辅基的颜色吗？如果没有辅酶，那么换低盐溶液梯度洗脱，或换个低浓度的盐上样，或换个弱一点的疏水柱；如果有辅酶或辅基，那就是辅酶与蛋白分离了。实验顺利。 |
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zhangyehong2楼2012-10-22 17:03:39
ynkuaile
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【答案】应助回帖
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看天: 金币+4, 鼓励交流 和分享 2012-10-30 16:10:02
看天: 金币+4, 鼓励交流 和分享 2012-10-30 16:10:02
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把你氢氧化钠洗脱的东西，用考马斯亮蓝检测下，看看是不是蛋白。或者把你离子交换，疏水，氢氧化钠洗脱的东西放一起跑个电泳。这样你就知道你最后的东西是什么。水洗脱不下来，乙醇洗脱不下来，只能用氢氧化钠处理柱子的，亲和力要多强，我认为不是蛋白分子，是个小分子，你蛋白的颜色估计就是这个小分子的颜色。他是什么颜色的？ 弱的疏水柱我觉得没效果，不同的疏水柱只是洗脱时的盐浓度不一样，要是水能洗脱下来，你倒是可以换。只有氢氧化钠洗脱的，换了没意义。 |
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11楼2012-10-25 10:18:08