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杯子然金虫 (著名写手)
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[求助]
求木聚糖酶的测定！
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| 求教各位大侠：木聚糖酶酶活如何测定？小弟做木聚糖酶实验，粗酶稀释500倍后测定得出酶活很低，请问酶活达到1000—10000以上U/ml的是如何得出来的，稀释了多少倍？若有高手做过的我想详细求教下？谢谢 |
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daiybe
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【答案】应助回帖
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杯子然: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-10-24 21:46:48
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由你的数据可以看出，你配置的木糖浓度是1mg/ml,做标准曲线时，你加0.2ml木糖溶液，然后你又加了2mlDNS，最后定容到10ml，那么，我要告诉你的是：你这10ml的体系里边总共含有0.2mg木糖，而这个对应的吸光度值是0.213，但是你测酶活时候读出的反应管中的OD也是0.213，那个可以确定的是，你这支反应管中总的木糖含量也就是2mg。但这2mg木糖来源于两个地方，一个是底物里边含有的（微量），另一个是被酶降解下来的木糖，这里并不存在你说的稀释这一说法，因为，测酶活的过程中，一般标准曲线使用怎样的体系，那么测定过程也用同样的体系。比如你的测法应该是1.8ml底物+0.2ml酶液+2mlDNS+6ml水，最后总体积为10ml，而我们平时用的是1.8ml底物溶液+0.2ml酶液+3mlDNS+10ml水，总体积为15ml，很简单，如有不明，欢迎发邮件详询lrh072006@126.com |
7楼2012-10-24 20:32:20
杯子然
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2楼2012-10-21 11:25:53
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【答案】应助回帖
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杯子然: 金币+10, ★★★很有帮助, 多谢帮助 2012-10-23 19:26:10
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杯子然: 金币+10, ★★★很有帮助, 多谢帮助 2012-10-23 19:26:10
| 你看你买的酶制剂的包装上关于其酶活力的定义,从中可以看出几个关键的东西，该酶活测定的温度，pH值，底物浓度等，然后按照这个去测定就可以了，每个公司的酶都有自己的特性，因为它是由不同的菌种生产的，酶学性质自然有很多的不同。如果你完全按照它酶活定义上的条件来测的话是可以测出它原来酶活的。按照问的，如果酶活有1000U,那么稀释倍数应该在3000——4000倍左右为佳，主要看OD差值，一般要严格控制在0.4-0.6之间，低于0.4.要适当减小稀释倍数，大于0.6要适当增加稀释倍数。 |
3楼2012-10-21 12:14:16
biolio2009
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5楼2012-10-22 22:46:26
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6楼2012-10-23 19:39:24
njutjhy
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