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杯子然

金虫 (著名写手)

[求助] 求木聚糖酶的测定!

求教各位大侠:木聚糖酶酶活如何测定?小弟做木聚糖酶实验,粗酶稀释500倍后测定得出酶活很低,请问酶活达到1000—10000以上U/ml的是如何得出来的,稀释了多少倍?若有高手做过的我想详细求教下?谢谢
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杯子然

金虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by daiybe at 2012-10-21 12:14:16
你看你买的酶制剂的包装上关于其酶活力的定义,从中可以看出几个关键的东西,该酶活测定的温度,pH值,底物浓度等,然后按照这个去测定就可以了,每个公司的酶都有自己的特性,因为它是由不同的菌种生产的,酶学性质 ...

请问前辈,标准曲线制作时,称取0.1g木糖,稀释定容到100ml,分别称取0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5(ml)木糖标准溶液于10ml玻璃管中,用蒸馏水补齐2ml,再加入2mlDNS试剂,沸水5min,然后冷却,加蒸馏水定容至10ml。请问若标曲0.2ml木糖的OD值为0.213,而实验测酶活的OD值也为0.213,请问产生的木糖是为0.2,还是0.02,因为前面步骤里取0.2 ml木糖最后定容至10ml相当于将木糖稀释了10倍。
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6楼2012-10-23 19:39:24
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杯子然

金虫 (著名写手)

自己顶下,求助各位大侠!
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2楼2012-10-21 11:25:53
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daiybe

金虫 (小有名气)

daiybe

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
rainwander: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-21 17:44:26
杯子然: 金币+10, ★★★很有帮助, 多谢帮助 2012-10-23 19:26:10
你看你买的酶制剂的包装上关于其酶活力的定义,从中可以看出几个关键的东西,该酶活测定的温度,pH值,底物浓度等,然后按照这个去测定就可以了,每个公司的酶都有自己的特性,因为它是由不同的菌种生产的,酶学性质自然有很多的不同。如果你完全按照它酶活定义上的条件来测的话是可以测出它原来酶活的。按照问的,如果酶活有1000U,那么稀释倍数应该在3000——4000倍左右为佳,主要看OD差值,一般要严格控制在0.4-0.6之间,低于0.4.要适当减小稀释倍数,大于0.6要适当增加稀释倍数。
爱一个人,比恨一个人难的太多了
3楼2012-10-21 12:14:16
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biolio2009

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
杯子然: 金币+5, 有帮助 2012-10-23 19:39:51
自己调整稀释倍数,使他的OD值落在标准曲线的合理范围之内,就可以了
4楼2012-10-22 08:51:58
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