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杯子然

金虫 (著名写手)

[求助] 求木聚糖酶的测定!

求教各位大侠:木聚糖酶酶活如何测定?小弟做木聚糖酶实验,粗酶稀释500倍后测定得出酶活很低,请问酶活达到1000—10000以上U/ml的是如何得出来的,稀释了多少倍?若有高手做过的我想详细求教下?谢谢
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坚持 努力加油好好干
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njutjhy

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
杯子然: 金币+5 2013-05-15 14:47:12
原因:
1.别人可能是U的定义可能是单位时间降解生成μg木糖的量,而你的U的定义可能是生成μmol的
2.别人可能是通过一些原核宿主什么的发酵N天之后得到高浓度的酶,然后稀释的。而你的酶浓度不高。
3.别人可能是耐热木聚糖酶,在100℃左右有很高的酶活,远高于你的常温酶的酶活。
冷眼看世间冷暖,笑谈人生得失
8楼2013-05-13 21:41:02
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杯子然

金虫 (著名写手)

自己顶下,求助各位大侠!
坚持 努力加油好好干
2楼2012-10-21 11:25:53
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daiybe

金虫 (小有名气)

daiybe

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
rainwander: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-21 17:44:26
杯子然: 金币+10, ★★★很有帮助, 多谢帮助 2012-10-23 19:26:10
你看你买的酶制剂的包装上关于其酶活力的定义,从中可以看出几个关键的东西,该酶活测定的温度,pH值,底物浓度等,然后按照这个去测定就可以了,每个公司的酶都有自己的特性,因为它是由不同的菌种生产的,酶学性质自然有很多的不同。如果你完全按照它酶活定义上的条件来测的话是可以测出它原来酶活的。按照问的,如果酶活有1000U,那么稀释倍数应该在3000——4000倍左右为佳,主要看OD差值,一般要严格控制在0.4-0.6之间,低于0.4.要适当减小稀释倍数,大于0.6要适当增加稀释倍数。
爱一个人,比恨一个人难的太多了
3楼2012-10-21 12:14:16
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biolio2009

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
杯子然: 金币+5, 有帮助 2012-10-23 19:39:51
自己调整稀释倍数,使他的OD值落在标准曲线的合理范围之内,就可以了
4楼2012-10-22 08:51:58
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