24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 590  |  回复: 5

yananhl

银虫 (小有名气)

[求助] 帮我看看是什么情况

我做的基因步移,我的第二轮PCR条带还很好。第三轮用的LA酶扩的也很好,但是换了酶扩第三轮,以及稀释1000倍后扩的怎么就堵在孔里下不来了,是什么情况啊,请高手看看。
回复此楼

» 本帖附件资源列表

  • 欢迎监督和反馈:小木虫仅提供交流平台,不对该内容负责。
    本内容由用户自主发布,如果其内容涉及到知识产权问题,其责任在于用户本人,如对版权有异议,请联系邮箱:xiaomuchong@tal.com
  • 附件 1 : 89.tif
  • 2012-10-19 21:31:02, 437.7 K

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tulip1213

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
为什么换酶扩?之前扩出来为什么不及时回收?不知道你目的条带是多大?换酶之后,条带扩出来没?扩出来的话,回收;电泳跑不出孔,说明DNA不纯。可能你的PCR体系污染
2楼2012-10-19 22:22:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yananhl

银虫 (小有名气)

因为我扩的片段大,3000多了达到,连接是个问题,老连接不成功。所以换酶扩,连接就正常。但是其它的都正常,就是换了酶然后就跑不出孔了。但是用LA酶扩的时候有一个随机引物第三轮也没有跑出孔,其它的都正常。如果是PCR体系污染了,怎么扩几次都是这种情况呢,用的都是同一批的PCR管。
3楼2012-10-21 14:14:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yananhl

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by tulip1213 at 2012-10-19 22:22:04
为什么换酶扩?之前扩出来为什么不及时回收?不知道你目的条带是多大?换酶之后,条带扩出来没?扩出来的话,回收;电泳跑不出孔,说明DNA不纯。可能你的PCR体系污染

因为我扩的片段大,3000多了达到,连接是个问题,老连接不成功。所以换酶扩,连接就正常。但是其它的都正常,就是换了酶然后就跑不出孔了。但是用LA酶扩的时候有一个随机引物第三轮也没有跑出孔,其它的都正常。如果是PCR体系污染了,怎么扩几次都是这种情况呢,用的都是同一批的PCR管。
4楼2012-10-21 14:14:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tulip1213

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by yananhl at 2012-10-21 14:14:32
因为我扩的片段大,3000多了达到,连接是个问题,老连接不成功。所以换酶扩,连接就正常。但是其它的都正常,就是换了酶然后就跑不出孔了。但是用LA酶扩的时候有一个随机引物第三轮也没有跑出孔,其它的都正常。如 ...

我5000都连成功了,何况3000。你拿有条带的做模板,稀释50或100倍p吧
5楼2012-10-21 15:52:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yananhl

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by tulip1213 at 2012-10-21 15:52:25
我5000都连成功了,何况3000。你拿有条带的做模板,稀释50或100倍p吧...

请问您用的什么载体连接的啊?我用的PMD19,连接老出问题。恩,就是稀释的也是堵在孔那了。用LA扩的还好
6楼2012-10-21 20:16:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yananhl 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0703化学调剂 348分 +13 唉我超真没招了 2026-04-06 14/700 2026-04-08 15:22 by screening
[考研] 277求调剂 +14 倪建设 2026-04-06 14/700 2026-04-08 15:18 by screening
[考研] 材料专硕 调剂 +17 CXN123456 2026-04-03 17/850 2026-04-08 11:10 by lijunpoly
[考研] 297求调剂 +16 GENJIOW 2026-04-07 17/850 2026-04-08 11:05 by 逆水乘风
[考研] 一志愿生物与医药,296分,求调剂 +14 66鹿 2026-04-03 16/800 2026-04-08 10:38 by tjzhao
[考研] 计算机11408 287 求调剂 +3 LiLe5 2026-04-07 3/150 2026-04-07 23:15 by shanqishi
[考研] 材料调剂 +11 一样YWY 2026-04-07 11/550 2026-04-07 15:13 by shdgaomin
[考研] 297分083200求助 +9 aekx 2026-04-05 9/450 2026-04-06 20:57 by flysky1234
[考研] 复试调剂 +5 asdasdassda 2026-04-05 5/250 2026-04-06 09:32 by dongzh2009
[考研] 301求调剂 +6 细胞相关蛋白 2026-04-02 10/500 2026-04-06 08:34 by jp9609
[考研] 348求调剂 +6 wukira 2026-04-04 6/300 2026-04-05 18:11 by 猪会飞
[考研] 298分 070300求调剂 +15 zwen03 2026-04-02 15/750 2026-04-05 12:52 by Hdyxbekcb
[考研] 能动调剂326专硕 +4 wan112233 2026-04-04 4/200 2026-04-04 22:47 by yu221
[考研] 320求调剂 +3 一样圆 2026-04-04 3/150 2026-04-04 22:29 by 啵啵啵0119
[考研] 282电子信息0854专硕调剂 +4 202451007219 2026-04-02 6/300 2026-04-04 21:55 by laoshidan
[考研] 278求调剂 +3 依旧! 2026-04-02 4/200 2026-04-04 20:27 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿沪9,求生物学调剂,326分 +6 刘墨墨 2026-04-04 6/300 2026-04-04 19:44 by 唐沐儿
[考研] 一志愿南农090401,268,求调剂 +5 一木鸟然 2026-04-04 5/250 2026-04-04 17:07 by babysonlkd
[考研] 268求调剂 +8 你好tg 2026-04-03 9/450 2026-04-04 05:08 by gswylq
[考研] 286求调剂 +8 lim0922 2026-04-02 8/400 2026-04-03 20:19 by rzh123456
信息提示
请填处理意见