24小时热门版块排行榜    

查看: 692  |  回复: 5

yananhl

银虫 (小有名气)

[求助] 帮我看看是什么情况

我做的基因步移,我的第二轮PCR条带还很好。第三轮用的LA酶扩的也很好,但是换了酶扩第三轮,以及稀释1000倍后扩的怎么就堵在孔里下不来了,是什么情况啊,请高手看看。
回复此楼

» 本帖附件资源列表

  • 欢迎监督和反馈:小木虫仅提供交流平台,不对该内容负责。
    本内容由用户自主发布,如果其内容涉及到知识产权问题,其责任在于用户本人,如对版权有异议,请联系邮箱:xiaomuchong@tal.com
  • 附件 1 : 89.tif
  • 2012-10-19 21:31:02, 437.7 K

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tulip1213

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
为什么换酶扩?之前扩出来为什么不及时回收?不知道你目的条带是多大?换酶之后,条带扩出来没?扩出来的话,回收;电泳跑不出孔,说明DNA不纯。可能你的PCR体系污染
2楼2012-10-19 22:22:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yananhl

银虫 (小有名气)

因为我扩的片段大,3000多了达到,连接是个问题,老连接不成功。所以换酶扩,连接就正常。但是其它的都正常,就是换了酶然后就跑不出孔了。但是用LA酶扩的时候有一个随机引物第三轮也没有跑出孔,其它的都正常。如果是PCR体系污染了,怎么扩几次都是这种情况呢,用的都是同一批的PCR管。
3楼2012-10-21 14:14:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yananhl

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by tulip1213 at 2012-10-19 22:22:04
为什么换酶扩?之前扩出来为什么不及时回收?不知道你目的条带是多大?换酶之后,条带扩出来没?扩出来的话,回收;电泳跑不出孔,说明DNA不纯。可能你的PCR体系污染

因为我扩的片段大,3000多了达到,连接是个问题,老连接不成功。所以换酶扩,连接就正常。但是其它的都正常,就是换了酶然后就跑不出孔了。但是用LA酶扩的时候有一个随机引物第三轮也没有跑出孔,其它的都正常。如果是PCR体系污染了,怎么扩几次都是这种情况呢,用的都是同一批的PCR管。
4楼2012-10-21 14:14:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tulip1213

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by yananhl at 2012-10-21 14:14:32
因为我扩的片段大,3000多了达到,连接是个问题,老连接不成功。所以换酶扩,连接就正常。但是其它的都正常,就是换了酶然后就跑不出孔了。但是用LA酶扩的时候有一个随机引物第三轮也没有跑出孔,其它的都正常。如 ...

我5000都连成功了,何况3000。你拿有条带的做模板,稀释50或100倍p吧
5楼2012-10-21 15:52:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yananhl

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by tulip1213 at 2012-10-21 15:52:25
我5000都连成功了,何况3000。你拿有条带的做模板,稀释50或100倍p吧...

请问您用的什么载体连接的啊?我用的PMD19,连接老出问题。恩,就是稀释的也是堵在孔那了。用LA扩的还好
6楼2012-10-21 20:16:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yananhl 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 DpSrDtM079iu 2026-08-22 4/200 2026-08-23 01:04 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 6/300 2026-08-23 00:52 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 10/500 2026-08-22 23:42 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 3/150 2026-08-22 22:03 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +3 zjuhero 2026-08-22 4/200 2026-08-22 20:02 by mycsru
[基金申请] 什么时候开奖? +7 CrisMessi 2026-08-18 8/400 2026-08-22 18:29 by 淀粉搬运工
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 14/700 2026-08-21 23:51 by cratir
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +10 kulium 2026-08-21 13/650 2026-08-21 21:58 by alongwaytogo
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
请填处理意见