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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 菌株复苏失败是怎么回事？
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sxxuan

金虫 (著名写手)

[求助] 菌株复苏失败是怎么回事？

实验室一直以来做了很多T克隆，克隆正确的菌株以甘油冻存，一般是700ul菌液+300ul灭菌甘油，混匀后-80℃冻存。以前一直都没有问题的，最近这两三个月复苏菌株总会出现复苏不成功，或者要摇多几个小时才出现浑浊的情况，请问会在哪方面出问题了？甚至是国庆前保存的菌株，放完假回来复苏都不成功
有人说是不是感受态效率不高导致后面的摇菌都不成功，会是这样吗？
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你的日子如何，你的力量也必如何！
1楼 2012-10-19 13:59:25
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

jinfangli

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
sxxuan: 金币+3, ★有帮助 2012-10-20 14:42:01
菌种保存在10%甘油中。最多不要超过20%。复苏时要是结果不理想，先把菌液划板，再挑再摇
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fight
2楼2012-10-19 15:10:12
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sxxuan

金虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-20 12:03:43
反复冻化不好。把冻存的菌种从-80拿出来，不要化掉，用无菌牙签或者接种环刮几下划板。把菌迅速放回-80. 直接从冻存摇的细菌活力差，而且多余的甘油对细菌生长不利，经划板的菌株活力好，可以挑菌摇菌提质粒或者做表 ...

谢谢，如果是放在冰上操作如何？由于-80冰箱放在另一栋楼，来回拿都有点距离，谢谢
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你的日子如何，你的力量也必如何！
4楼2012-10-20 14:40:28
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普通回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
sxxuan: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-10-20 14:40:46
反复冻化不好。把冻存的菌种从-80拿出来，不要化掉，用无菌牙签或者接种环刮几下划板。把菌迅速放回-80. 直接从冻存摇的细菌活力差，而且多余的甘油对细菌生长不利，经划板的菌株活力好，可以挑菌摇菌提质粒或者做表达用。
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3楼2012-10-20 12:03:43
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sxxuan

金虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jinfangli at 2012-10-19 15:10:12
菌种保存在10%甘油中。最多不要超过20%。复苏时要是结果不理想，先把菌液划板，再挑再摇

如果超过20%就不稳定了吗？我后来改用了10%的甘油都有出现这样的情况，是怎么回事了？而且是冻存都第一次拿出来用而已，才隔了一周的时间
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你的日子如何，你的力量也必如何！
5楼2012-10-20 14:41:53
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jinfangli

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
sxxuan: 金币+2, ★有帮助 2012-10-22 16:37:06
引用回帖:
5楼: Originally posted by sxxuan at 2012-10-20 14:41:53
如果超过20%就不稳定了吗？我后来改用了10%的甘油都有出现这样的情况，是怎么回事了？而且是冻存都第一次拿出来用而已，才隔了一周的时间...

你保的菌种应该是活性比较好的阶段，保种时要注意无菌操作，我们这边还没出现这种情况，最好拿菌划板，重新挑菌
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fight
6楼2012-10-20 14:54:20
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-21 17:46:39
sxxuan: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-10-22 16:36:57
引用回帖:
4楼: Originally posted by sxxuan at 2012-10-20 14:40:28
谢谢，如果是放在冰上操作如何？由于-80冰箱放在另一栋楼，来回拿都有点距离，谢谢...

我的意思是尽量不要冻化保藏菌种。其实一般的细菌是很皮实的，化过几次应该还能复苏。如果冰箱和实验室距离远也没办法了。就冰上操作比室温下强。你的甘油放了不少，直接摇菌可能会抑制菌的生长，先划板是比较好。
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7楼2012-10-21 02:20:04
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sxxuan

金虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by jinfangli at 2012-10-20 14:54:20
你保的菌种应该是活性比较好的阶段，保种时要注意无菌操作，我们这边还没出现这种情况，最好拿菌划板，重新挑菌...

一般都是过夜摇菌第二天保菌的，大概摇16h，是不是太过了？
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你的日子如何，你的力量也必如何！
8楼2012-10-21 20:25:28
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sxxuan

金虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-21 02:20:04
我的意思是尽量不要冻化保藏菌种。其实一般的细菌是很皮实的，化过几次应该还能复苏。如果冰箱和实验室距离远也没办法了。就冰上操作比室温下强。你的甘油放了不少，直接摇菌可能会抑制菌的生长，先划板是比较好。...

10%的甘油呢？会不会影响？
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你的日子如何，你的力量也必如何！
9楼2012-10-21 20:25:57
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-22 07:24:24
sxxuan: 金币+2, ★有帮助 2012-10-22 16:36:38
引用回帖:
9楼: Originally posted by sxxuan at 2012-10-21 20:25:57
10%的甘油呢？会不会影响？...

我做菌种保藏甘油的浓度是15%。说是抑制，多数情况下也可以长，就是长得不好，不好用。所以总是先划下板再摇。多一个晚上在板上复苏一下也没什么大不了的吧。
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10楼2012-10-21 23:29:53
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