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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 菌株复苏失败是怎么回事？
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sxxuan

金虫 (著名写手)

[求助] 菌株复苏失败是怎么回事？

实验室一直以来做了很多T克隆，克隆正确的菌株以甘油冻存，一般是700ul菌液+300ul灭菌甘油，混匀后-80℃冻存。以前一直都没有问题的，最近这两三个月复苏菌株总会出现复苏不成功，或者要摇多几个小时才出现浑浊的情况，请问会在哪方面出问题了？甚至是国庆前保存的菌株，放完假回来复苏都不成功
有人说是不是感受态效率不高导致后面的摇菌都不成功，会是这样吗？
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你的日子如何，你的力量也必如何！
1楼 2012-10-19 13:59:25
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jinfangli

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
sxxuan: 金币+2, ★有帮助 2012-10-22 16:37:06
引用回帖:
5楼: Originally posted by sxxuan at 2012-10-20 14:41:53
如果超过20%就不稳定了吗？我后来改用了10%的甘油都有出现这样的情况，是怎么回事了？而且是冻存都第一次拿出来用而已，才隔了一周的时间...

你保的菌种应该是活性比较好的阶段，保种时要注意无菌操作，我们这边还没出现这种情况，最好拿菌划板，重新挑菌
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fight
6楼2012-10-20 14:54:20
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jinfangli

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
sxxuan: 金币+3, ★有帮助 2012-10-20 14:42:01
菌种保存在10%甘油中。最多不要超过20%。复苏时要是结果不理想，先把菌液划板，再挑再摇
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fight
2楼2012-10-19 15:10:12
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
sxxuan: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-10-20 14:40:46
反复冻化不好。把冻存的菌种从-80拿出来，不要化掉，用无菌牙签或者接种环刮几下划板。把菌迅速放回-80. 直接从冻存摇的细菌活力差，而且多余的甘油对细菌生长不利，经划板的菌株活力好，可以挑菌摇菌提质粒或者做表达用。
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3楼2012-10-20 12:03:43
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sxxuan

金虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-20 12:03:43
反复冻化不好。把冻存的菌种从-80拿出来，不要化掉，用无菌牙签或者接种环刮几下划板。把菌迅速放回-80. 直接从冻存摇的细菌活力差，而且多余的甘油对细菌生长不利，经划板的菌株活力好，可以挑菌摇菌提质粒或者做表 ...

谢谢，如果是放在冰上操作如何？由于-80冰箱放在另一栋楼，来回拿都有点距离，谢谢
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你的日子如何，你的力量也必如何！
4楼2012-10-20 14:40:28
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