[求助] 菌株复苏失败是怎么回事？

3楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-20 12:03:43
反复冻化不好。把冻存的菌种从-80拿出来，不要化掉，用无菌牙签或者接种环刮几下划板。把菌迅速放回-80. 直接从冻存摇的细菌活力差，而且多余的甘油对细菌生长不利，经划板的菌株活力好，可以挑菌摇菌提质粒或者做表 ...

2楼: Originally posted by jinfangli at 2012-10-19 15:10:12
菌种保存在10%甘油中。最多不要超过20%。复苏时要是结果不理想，先把菌液划板，再挑再摇

6楼: Originally posted by jinfangli at 2012-10-20 14:54:20
你保的菌种应该是活性比较好的阶段，保种时要注意无菌操作，我们这边还没出现这种情况，最好拿菌划板，重新挑菌...

7楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-21 02:20:04
我的意思是尽量不要冻化保藏菌种。其实一般的细菌是很皮实的，化过几次应该还能复苏。如果冰箱和实验室距离远也没办法了。就冰上操作比室温下强。你的甘油放了不少，直接摇菌可能会抑制菌的生长，先划板是比较好。...

10楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-21 23:29:53
我做菌种保藏甘油的浓度是15%。说是抑制，多数情况下也可以长，就是长得不好，不好用。所以总是先划下板再摇。多一个晚上在板上复苏一下也没什么大不了的吧。...

12楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-23 07:59:03
感受态一般是直接加几微升在LB摇菌的，而且做的感受态细胞也不含甘油啊。感受态细胞不能反复冻化，处理好后直接分装成100ul/管，液氮冻了存放在-80°C。如果没有反复冻化，可能是细胞没做好。...

14楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-28 02:59:47
我做感受态都是处理好了直接冻存的。用的时候在冰上化了做转化。如果说你觉得感受态不行了，可以把空对照稀释后涂一个不加抗生素的LB板，应该长很多菌的。...