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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 菌株复苏失败是怎么回事？
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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sxxuan

金虫 (著名写手)

[求助] 菌株复苏失败是怎么回事？

实验室一直以来做了很多T克隆，克隆正确的菌株以甘油冻存，一般是700ul菌液+300ul灭菌甘油，混匀后-80℃冻存。以前一直都没有问题的，最近这两三个月复苏菌株总会出现复苏不成功，或者要摇多几个小时才出现浑浊的情况，请问会在哪方面出问题了？甚至是国庆前保存的菌株，放完假回来复苏都不成功
有人说是不是感受态效率不高导致后面的摇菌都不成功，会是这样吗？
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你的日子如何，你的力量也必如何！
1楼 2012-10-19 13:59:25
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sxxuan

金虫 (著名写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-23 07:59:03
感受态一般是直接加几微升在LB摇菌的，而且做的感受态细胞也不含甘油啊。感受态细胞不能反复冻化，处理好后直接分装成100ul/管，液氮冻了存放在-80°C。如果没有反复冻化，可能是细胞没做好。...

感受态不是加甘油之后才放在-80冻的吗？没有反复冻化感受态，一般都是用的时候再从-80拿出来放在冰上融解的。
就是说如果后面菌株出问题了，也有可能是感受态没有做好的缘故？
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你的日子如何，你的力量也必如何！
13楼2012-10-27 21:57:25
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jinfangli

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
sxxuan: 金币+3, ★有帮助 2012-10-20 14:42:01
菌种保存在10%甘油中。最多不要超过20%。复苏时要是结果不理想，先把菌液划板，再挑再摇
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fight
2楼2012-10-19 15:10:12
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
sxxuan: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-10-20 14:40:46
反复冻化不好。把冻存的菌种从-80拿出来，不要化掉，用无菌牙签或者接种环刮几下划板。把菌迅速放回-80. 直接从冻存摇的细菌活力差，而且多余的甘油对细菌生长不利，经划板的菌株活力好，可以挑菌摇菌提质粒或者做表达用。
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3楼2012-10-20 12:03:43
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sxxuan

金虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-20 12:03:43
反复冻化不好。把冻存的菌种从-80拿出来，不要化掉，用无菌牙签或者接种环刮几下划板。把菌迅速放回-80. 直接从冻存摇的细菌活力差，而且多余的甘油对细菌生长不利，经划板的菌株活力好，可以挑菌摇菌提质粒或者做表 ...

谢谢，如果是放在冰上操作如何？由于-80冰箱放在另一栋楼，来回拿都有点距离，谢谢
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你的日子如何，你的力量也必如何！
4楼2012-10-20 14:40:28
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