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sxxuan

金虫 (著名写手)

[求助] 菌株复苏失败是怎么回事?

实验室一直以来做了很多T克隆,克隆正确的菌株以甘油冻存,一般是700ul菌液+300ul灭菌甘油,混匀后-80℃冻存。以前一直都没有问题的,最近这两三个月复苏菌株总会出现复苏不成功,或者要摇多几个小时才出现浑浊的情况,请问会在哪方面出问题了?甚至是国庆前保存的菌株,放完假回来复苏都不成功
有人说是不是感受态效率不高导致后面的摇菌都不成功,会是这样吗?
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你的日子如何,你的力量也必如何!
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sxxuan

金虫 (著名写手)

引用回帖:
12楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-23 07:59:03
感受态一般是直接加几微升在LB摇菌的,而且做的感受态细胞也不含甘油啊。感受态细胞不能反复冻化,处理好后直接分装成100ul/管,液氮冻了存放在-80°C。如果没有反复冻化,可能是细胞没做好。...

感受态不是加甘油之后才放在-80冻的吗?没有反复冻化感受态,一般都是用的时候再从-80拿出来放在冰上融解的。
就是说如果后面菌株出问题了,也有可能是感受态没有做好的缘故?
你的日子如何,你的力量也必如何!
13楼2012-10-27 21:57:25
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jinfangli

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
sxxuan: 金币+3, 有帮助 2012-10-20 14:42:01
菌种保存在10%甘油中。最多不要超过20%。复苏时要是结果不理想,先把菌液划板,再挑再摇
fight
2楼2012-10-19 15:10:12
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
sxxuan: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-10-20 14:40:46
反复冻化不好。把冻存的菌种从-80拿出来,不要化掉,用无菌牙签或者接种环刮几下划板。把菌迅速放回-80. 直接从冻存摇的细菌活力差,而且多余的甘油对细菌生长不利,经划板的菌株活力好,可以挑菌摇菌提质粒或者做表达用。
3楼2012-10-20 12:03:43
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sxxuan

金虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-20 12:03:43
反复冻化不好。把冻存的菌种从-80拿出来,不要化掉,用无菌牙签或者接种环刮几下划板。把菌迅速放回-80. 直接从冻存摇的细菌活力差,而且多余的甘油对细菌生长不利,经划板的菌株活力好,可以挑菌摇菌提质粒或者做表 ...

谢谢,如果是放在冰上操作如何?由于-80冰箱放在另一栋楼,来回拿都有点距离,谢谢
你的日子如何,你的力量也必如何!
4楼2012-10-20 14:40:28
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